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Diagnóstico laboratorial: Enfermedad de los edemas

¿Qué métodos de diagnóstico laboratorial puedo usar para diagnosticar la enfermedad de los edemas? ¿Cuál debo elegir según la situación? ¿Cómo interpreto los resultados?

Test disponibles

Cultivo bacteriano

  • Aislamiento de organismos vivos.
  • Tipo de muestra: heces, contenido intestinal.
  • Pros:
    • Las bacterias son fáciles de cultivar en 1 día.
    • Fácil de hacer en cualquier laboratorio (incluso interno).
    • Coste relativamente bajo.
  • Contras:
    • Algunas E. coli forman parte de la flora intestinal normal.
    • Los cerdos tienen múltiples E. coli al mismo tiempo.
    • Si los cerdos han sido tratados previamente con antibióticos, esto puede impedir el crecimiento bacteriano.

Susceptibilidad antimicrobiana (antibiograma)

  • Test in vitro: capacidad de un organismo vivo para crecer bajo concentraciones específicas de diferentes antimicrobianos.
  • Tipo de muestras: heces, contenido intestinal.
  • Pros:
    • Identificación de susceptibilidad o resistencia de cepas específicas a antimicrobianos comunes.
    • Identificación de tendencias de resistencia a los antimicrobianos.
  • Contras:
    • Requiere un aislado bacteriano.
    • Las pruebas in vitro pueden diferir ligeramente de los resultados in vivo.
    • Es posible que algunos antimicrobianos específicos no se incluyan o requieran pruebas especiales separadas.
    • Coste moderado.

Histopatología

  • Evalúa la presencia de lesiones en tejidos (daño) que pueden confirmar la presencia de enfermedad. En ocasiones, también se puede detectar la presencia de organismos directamente (bacterias y parásitos) o indirectamente (virus) mediante tinciones especiales adicionales.
  • Tipo de muestra: tejidos.
  • Pros:
    • Asocia la adhesión bacteriana con el daño intestinal.
    • No se necesita tinción especial.
  • Contras:
    • Hay que fijar con formol los tejidos intestinales en menos de 15 minutos tras la muerte del animal ya que el tejido intestinal se descompone rápidamente.
    • La enfermedad puede ser segmentaria, por lo que deben enviarse múltiples muestras intestinales.

Genotipado

  • Una técnica PCR (reacción en cadena de la polimerasa) que detecta la presencia de una secuencia específica de ácidos nucleicos (ADN) asociados con genes de virulencia conocidos.
  • Pros:
    • Realizado mediante PCR; fácil de hacer.
    • Ayuda a identificar la patogenicidad al detectar la presencia de genes (no necesariamente la expresión de genes) asociados con factores de virulencia.
      • Genes de toxinas: EAST1, LT, STa, STb, Stx1, Stx2, Stx2e.
      • Genes de Pilus: F18, F41, K88 (F4), K99 (F5), 987P (F6).
      • Genes de adhesinas: AIDA, EAEA, PAA
    • Facilita la selección adecuada de la vacuna (en función de los pili).
    • Ayuda a confirmar que el aislado tiene genes de la enfermedad de los edemas.

Genes de E. coli detectados mediante genotipificación por PCR y por su función. Los genes resaltados en rojo son importantes para el diagnóstico de la enfermedad de los edemas.

Gen Tipo Descripción
EAST1 Toxina La toxina intestinal se une al mismo receptor y estimula la misma vía secretora que Sta (la causa de la diarrea no está bien establecida)
LT Toxina Toxina Intestinal que estimula la secreción intestinal
STa Toxina Toxina intestinal que estimula la secreción intestinal principalmente en cerdos jóvenes (disminuye la absorción de agua y electrolitos)
STb Toxina Toxina intestinal que estimula una diarrea secretora principalmente en cerdos de más edad (aumenta la secreción de los enterocitos)
Stx1 Toxina La toxina intestinal se puede encontrar en cepas patógenas y no patógenas
Stx2 Toxina La toxina intestinal se puede encontrar en cepas patógenas y no patógenas
Stx2e Toxina Toxina sistémica que induce daño vascular y enfermedad de los edemas
F18 (F107) Adhesina Pili (fimbria) usada para adherirse que está presente después de 20 días de edad y comúnmente asociada con diarrea post destete y enfermedad de los edemas
F41 Adhesina Pili (fimbria) usada para la adhesión principalmente en neonatos
K88 (F4) Adhesina Pili (fimbria) usada para adherirse desde el nacimiento a todas las edades
K99 (F5) Adhesina Pili (fimbria) usada para la adhesión principalmente en neonatos
987P (F6) Adhesina Pili (fimbria) usada para la adhesión principalmente en neonatos
AIDA Adhesina "Adhesina involucrada en la adherencia difusa" no fimbrial, más comúnmente encontrada junto con F18
EAE Adhesina Adhesina no fimbrial que contribuye a las lesiones de adhesión y borrado ("attaching-and-effacing")
PAA Adhesina Adhesina no fimbrial esencial para que se produzcan las lesiones de adhesión y borrado ("attaching-and-effacing")
  • Contras:
    • Requiere un aislamiento bacteriano.
    • Los cerdos pueden tener más de una cepa al mismo tiempo, por lo que debemos confiar en que hayamos aislado la cepa correcta.
    • Precio moderado, pero normalmente solo se analiza un aislado.

Interpretación de resultados:

Cultivo bacteriano:

  • Debe ser una E. coli hemolítica.
    Figura 1. Cultivo puro de E. coli hemolítica en agar sangre. La zona clara alrededor de cada colonia bacteriana indica hemólisis (descomposición de la sangre en placa de agar). Fuente: Universidad Estatal de Iowa, Laboratorio de Diagnóstico Veterinario, Sección de Bacteriología.

    Figura 1. Cultivo puro de E. coli hemolítica en agar sangre. La zona clara alrededor de cada colonia bacteriana indica hemólisis (descomposición de la sangre en placa de agar). Fuente: Universidad Estatal de Iowa, Laboratorio de Diagnóstico Veterinario, Sección de Bacteriología.

  • Pureza:
    • Crecimiento puro: altamente sugestivo de que está contribuyendo a la enfermedad.
    • Crecimiento mixto: valor cuestionable.
  • Cantidad:
    • Alta: altamente sugestivo de que está contribuyendo a la enfermedad.
    • Moderada: interpretación variable.
    • Bajo: valor cuestionable (podría ser un contaminante).
    • Sin crecimiento: Animal posiblemente tratado previamente con antibióticos o agente sin contribución significativa.

Susceptibilidad antimicrobiana (antibiograma):

  • Susceptible: posible buena elección para el tratamiento si el antimicrobiano puede llegar al tejido diana.
  • Resistente: hay que seleccionar un antimicrobiano diferente.
  • MIC: si se realiza la MIC (mínima concentración inhibitoria) hay que asegurarse que el antimicrobiano seleccionado alcanza el valor MIC indicado en el órgano diana.

Histopatología:

  • Positivo: Fuerte asociación como causante si es capaz de demostrar lesiones intestinales con E. coli adherida a células epiteliales.
  • Negativo: Sin lesiones intestinales.

Genotipado:

  • El genotipado es necesario para confirmar que el aislado tiene factores de virulencia asociados con la enfermedad de los edemas.
    • Debe ser F4 o F18.
    • Debe tener la toxina semejante a shiga (Stx2e).

Escenario
Cerdos con diarrea postdestete:

  • Recoge hisopos rectales de 2 o más cerdos con diarrea, no tratados con antibióticos y envíalos para cultivo bacteriano, antibiograma y genotipado.
  • Eutanasia 1-3 lechones con diarrea que no hayan recibido tratamiento. Inmediatamente recoge 3 muestras de intestino de cada lechón y ponlas en solución de formol. Recoge muestras intestinales frescas para enviarlas refrigeradas para cultivo bacteriológico, antibiograma y genotipado.

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