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Diagnóstico laboratorial: Mycoplasma hyopneumoniae

¿Qué métodos de diagnóstico laboratorial puedo usar para diagnosticar M. hyo? ¿Cuál debo elegir según la situación? ¿Cómo interpreto los resultados?

Test disponibles:

Patología macroscópica

  • Inspección visual de lesiones pulmonares.

Figura 1. Imagen que muestra la consolidación craneoventral clásica asociada a Mycoplasma hyopneumoniae (no diagnóstica) y muchas otras infecciones bacterianas, así como algunas infecciones por el virus de la influenza A.

Figura 1. Imagen que muestra la consolidación craneoventral clásica asociada a Mycoplasma hyopneumoniae (no diagnóstica) y muchas otras infecciones bacterianas, así como algunas infecciones por el virus de la influenza A.

  • Pros:
    • Fácil de hacer.
    • Puede evaluar infecciones tardías en cerdos enviados al matadero.
  • Contras:
    • No diagnóstico/patognomónico; muchas otras posibles causas.
    • Requiere otra confirmación diagnóstica.

Cultivo bacteriano

  • Aislamiento de organismos vivos a partir de tejidos con lesiones o lavado broncoalveolar.
  • Tipos de muestras: pulmón o lavado broncoalveolar.
  • Pros:
    • Criterio de referencia.
    • Los cerdos pueden dar positivo durante 7-8 meses (largo período de colonización).
  • Contras:
    • Requiere un medio de cultivo especial (medio Friis).
    • Solo disponible en muy pocos laboratorios.
    • Caro.
    • Muy difícil de cultivar (muchos falsos negativos).

Inmunohistoquímica (IHC)

  • Detecta la presencia de antígeno bacteriano.
  • Tipo de muestra: tejido pulmonar.
  • Pros:
    • Detecta bacterias en el sitio de la lesión (buena prueba de causalidad).
    • Los cerdos pueden dar positivo durante 7-8 meses (largo período de colonización).
  • Contras:
    • Tiene que enviarse la muestra de tejido correcta – el tejido pulmonar debe contener una sección transversal de las vías respiratorias (células epiteliales bronquiales).
    • Requiere que haya una cantidad de bacterias significativamente mayor que la PCR.
    • Solo evalúa una pequeña cantidad de tejido.

Figura 2. Buena muestra de tejido pulmonar para histopatología con presencia de vías respiratorias (círculos redondos blancos) en la sección transversal.

Figura 2. Buena muestra de tejido pulmonar para histopatología con presencia de vías respiratorias (círculos redondos blancos) en la sección transversal.

Anticuerpos fluorescentes (FA)

  • Detecta la presencia de antígeno bacteriano.
  • Tipo de muestra: tejido pulmonar.
  • Pros:
    • Detecta al virus en el sitio de la lesión (buena prueba de causalidad).
    • Los cerdos pueden dar positivo durante 7-8 meses (largo período de colonización).
  • Contras:
    • Tiene que enviarse la muestra de tejido correcta – el tejido pulmonar debe contener una sección transversal de las vías respiratorias (células epiteliales bronquiales)(Figura 2).
    • Requiere que haya una cantidad de bacterias significativamente mayor que la PCR.
    • Sólo evalúa una pequeña cantidad de tejido.

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

  • Detecta la presencia de secuencias específicas de ácido nucleico bacteriano (ADN).
  • Tipos de muestras: pulmón, hisopo (nasal, laríngeo, traqueobronquial o bronquial) o lavado broncoalveolar.
  • Pros:
    • Sensibilidad muy alta (puede detectar pequeñas cantidades de bacteria)
    • Se pueden combinar múltiples muestras para aumentar la sensibilidad diagnóstica al hacer un diagnóstico de granja.
    • Los cerdos pueden dar positivo durante 7-8 meses (largo período de colonización).
    • Coste moderado.
  • Contras:
    • No demuestra la enfermedad.
    • Los fluidos orales son un tipo de muestra deficiente (muchos falsos negativos)

Tabla 1: Resumen esquemático de la investigación y los resultados de campo sobre la sensibilidad de diferentes tipos de muestras para las pruebas de PCR de Mycoplasma hyopneumoniae.

Sensibilidad relativa Pooling*
Fluidos orales - No
Hisopo nasal + Variable
Hisopo laríngeo ++ Beneficioso
Hisopo traqueobronquial ++ Beneficioso
Hisopo bronquial +++ Beneficioso
Lavado broncoalveolar ++ No
Tejido pulmonar ++++

* El pooling o agrupar muestras puede ser beneficioso para aumentar la sensibilidad diagnóstica al realizar un diagnóstico de granja; no de un solo cerdo.

Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA)

  • Detecta la presencia de anticuerpos.
  • Tipo de muestra: suero.
  • Pros:
    • Los animales permanecen positivos durante mucho tiempo.
    • Puede utilizarse en casos crónicos.
  • Contras:
    • Los anticuerpos específicos y el momento de la detección pueden variar ligeramente entre los distintos kits comerciales disponibles.
    • No diferencia entre anticuerpos maternales y los de exposición.
    • El nivel de anticuerpos no se correlaciona con la protección.
    • La vacunación no induce seroconversión (depende en gran medida de la vacuna y el ensayo utilizado).
    • Muchos cerdos infectados no seroconvierten.
    • Los anticuerpos no siempre se detectan durante todo el período de la infección.
    • Cierta reactividad cruzada con otros Mycoplasmas, especialmente M. flocculare, que no es patógeno y se encuentra comúnmente en cerdos.

Interpretación de resultados:

Patología macroscópica:

  • Positivo: La patología macroscópica del pulmón puede proporcionar un posible diagnóstico.
  • Negativo: Los casos tempranos por lo general no se manifiestan con lesiones pulmonares extensas.

Cultivo bacteriano:

  • Positivo: Confirma la enfermedad.
  • Negativo: Negativo, la bacteria no se detecta si la prueba se realiza mucho después de la infección o del uso de antibióticos, o simplemente no puede crecer debido al crecimiento excesivo de otras bacterias (presente pero muy difícil de cultivar).

IHC:

  • Positivo: La bacteria está presente en el sitio de la lesión.
  • Negativo: Negativo o infección demasiado antigua para detectar la bacteria o animal tratado previamente con antibióticos.

FA:

  • Positivo: La bacteria está presente en el sitio de la lesión.
  • Negativo: Negativo o infección demasiado antigua para detectar la bacteria o animal tratado previamente con antibióticos.

PCR:

  • Positivo: La bacteria está presente; no confirma la enfermedad.
  • Negativo: Negativo o infección demasiado antigua para detectar la bacteria o animal tratado previamente con antibióticos.

ELISA:

  • Positivo: Anticuerpos maternales o exposición anterior (normalmente de 3 a 8 semanas post-exposición) a vacuna o bacteria de campo.
  • Negativo: Negativo o infección que no estimula la seroconversión o demasiado reciente para ser detectada (generalmente tarda de 3 a 8 semanas post-exposición).

Escenarios

Cerdos de engorde con tos crónica:

  • Necropsia 1-3 cerdos muertos recientemente o eutanasia cerdos con tos. Evalúa macroscópicamente los pulmones en busca de consolidación craneoventral. Recoge varios trozos de pulmón (asegúrate de incluir las vías respiratorias en la muestra) y fíjalos en formol para IHC o FA.
  • El porcentaje de pulmón con lesiones está directamente relacionado con el impacto económico de la enfermedad.

Confirmar que los animales de reposición son negativos a Mycoplasma hyopneumoniae

  • Asegúrate de que no haya signos clínicos de tos.
  • Recoge al menos 30 muestras aleatorias de suero de la reposición y analízalas mediante ELISA.

Vigilar la excreción en la reposición antes de introducirla en una granja de reproductoras positiva o negativa

  • Asegúrate de que no haya signos clínicos de tos.
  • Recoge al menos 30 muestras aleatorias de hisopo laríngeo de la reposición. Mezclarlas en grupos de 5 o 6 y analizar mediante PCR.

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