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Diagnóstico laboratorial: Peste porcina africana

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¿Qué métodos de diagnóstico laboratorial puedo usar para diagnosticar peste porcina africana? ¿Cuál debo elegir según la situación? ¿Cómo interpreto los resultados?

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El siguiente gráfico muestra los cambios en la concentración (eje Y) a lo largo del tiempo (eje X) de los diferentes analitos utilizados en los ensayos. Después de la exposición, la viremia comenzará en 1 o 2 días y durará 3-4 semanas. La seroconversión (detección de anticuerpos) normalmente tiene lugar a los 14 días después de la exposición y dura muchos meses o años.

Figura 1. Esquema de la detección de virus y anticuerpos, así como la variabilidad en la virulencia de la cepa después de la exposición a la PPA. Fuente: Laboratorio de referencia de la Unión Europea para la PPA.

Figura 1. Esquema de la detección de virus y anticuerpos, así como la variabilidad en la virulencia de la cepa después de la exposición a la PPA. Fuente: Laboratorio de referencia de la Unión Europea para la PPA.

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

  • Detecta la presencia de secuencias específicas de ácido nucleico viral (ADN).
  • Tipos de muestras: suero, sangre o tejidos.
  • Pros:
    • Método más sensible y preferido para detectar el agente.
    • Coste moderado:
      • A menudo se pueden agrupar muestras para reducir el coste y minimizar la pérdida de sensibilidad.
  • Contras:
    • No se puede utilizar suero, requiere sangre entera.
    • Requiere primers (cebadores) adecuados.

Hemadsorción (HAT)

  • Detecta la presencia de virus a través de la unión de los eritrocitos a la membrana externa (citoplasmática) de los macrófagos porcinos infectados con el virus de la PPA.
  • Tipos de muestras: suero o plasma.
  • Pros:
    • Una de las pruebas de referencia estándar.
  • Contras:
    • Algunas cepas de campo no inducen hemadsorción y los resultados negativos suelen requerir confirmación mediante PCR.

Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas de detección de antígenos (Ag-ELISA)

  • Detecta la presencia del agente.
  • Tipos de muestras: generalmente sangre y posiblemente otros tejidos específicos (seguir las recomendaciones del kit).
  • Pros:
    • Kits comerciales disponibles.
    • Relativamente barato.
  • Contras:
    • Mucha menos sensibilidad que PCR.
    • No se recomienda agrupar muestras.
    • Resultados negativos normalmente requieren confirmación mediante PCR.

Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas de detección de anticuerpos (Ab-ELISA)

  • Detecta la presencia de anticuerpos.
  • Tipos de muestras: suero o plasma.
  • Pros:
    • Los animales permanecen positivos durante varios meses o años.
    • Puede utilizarse en casos crónicos.
    • Puede utilizarse en casos de baja virulencia/subclínicos.
    • La seroconversión suele ocurrir en 7 y 10 días.
    • Actualmente no hay vacunas comerciales disponibles que confundan la interpretación de los resultados.
  • Contras:
    • Los animales tardan entre 7 y 10 días en volverse seropositivos.
    • No distingue entre anticuerpos maternos y exposición.

Anticuerpos fluorescentes indirectos (IFA)

  • Detecta la presencia de anticuerpos.
  • Tipos de muestras: suero o plasma.
  • Pros:
    • Prueba confirmatoria en muestras inesperadamente positivas a ELISA.
  • Contras:
    • Requiere que los animales hayan estado infectados durante al menos 1 semana.
    • No es factible para un gran número de muestras.
    • Los resultados dependen de la cepa vírica usada en la prueba.
    • La fiabilidad depende mucho de la habilidad de los técnicos.

Figura 2. Diagrama que demuestra el uso de PPA IFA como prueba confirmatoria para muestras que salen inesperadamente positivas a PPA mediante ELISA. Una muestra presuntamente negativa que da un resultado negativo en ELISA se considera negativa. Si esta muestra da inesperadamente un resultado positivo, entonces se puede realizar una PPA IFA como prueba confirmatoria. Es decir, si la prueba IFA es positiva, se confirma que la muestra es positiva. Si la prueba de IFA es negativa, asumiremos que fue un falso positivo siempre que la PCR también sea negativa para confirmar que no hay infección reciente.

Figura 2. Diagrama que demuestra el uso de PPA IFA como prueba confirmatoria para muestras que salen inesperadamente positivas a PPA mediante ELISA. Una muestra presuntamente negativa que da un resultado negativo en ELISA se considera negativa. Si esta muestra da inesperadamente un resultado positivo, entonces se puede realizar una PPA IFA como prueba confirmatoria. Es decir, si la prueba IFA es positiva, se confirma que la muestra es positiva. Si la prueba de IFA es negativa, asumiremos que fue un falso positivo siempre que la PCR también sea negativa para confirmar que no hay infección reciente.

Inmunoperoxidasa indirecta (IPT)

  • Detecta la presencia de anticuerpos.
  • Tipos de muestras: suero o plasma.
  • Pros:
    • Prueba confirmatoria en muestras inesperadamente positivas a ELISA.
    Contras:
    • Requiere que los animales hayan estado infectados durante al menos 1 semana.
    • No es factible para un gran número de muestras.
    • Los resultados dependen de la cepa vírica usada en la prueba.
    • La fiabilidad depende mucho de la habilidad de los técnicos.

Figura 3. Diagrama que demuestra el uso de PPA IPT como prueba confirmatoria para muestras que salen inesperadamente positivas a PPA mediante ELISA. Una muestra presuntamente negativa que da un resultado negativo en ELISA se considera negativa. Si esta muestra da inesperadamente un resultado positivo, entonces se puede realizar una PPA IPT como prueba confirmatoria. Es decir, si la prueba de IPT es positiva, se confirma que la muestra es positiva. Si la prueba de IPT es negativa, asumiremos que fue un falso positivo siempre que la PCR también sea negativa para confirmar que no hay infección reciente.

Figura 3. Diagrama que demuestra el uso de PPA IPT como prueba confirmatoria para muestras que salen inesperadamente positivas a PPA mediante ELISA. Una muestra presuntamente negativa que da un resultado negativo en ELISA se considera negativa. Si esta muestra da inesperadamente un resultado positivo, entonces se puede realizar una PPA IPT como prueba confirmatoria. Es decir, si la prueba de IPT es positiva, se confirma que la muestra es positiva. Si la prueba de IPT es negativa, asumiremos que fue un falso positivo siempre que la PCR también sea negativa para confirmar que no hay infección reciente.

Interpretación de resultados:

A menudo, se necesita realizar varias pruebas para proporcionar una mejor interpretación del diagnóstico de PPA.

Tabla 1. Interpretación de los resultados diagnósticos de PPA. Fuente: Laboratorio de referencia de la Unión Europea para la peste porcina africana.

Prueba Resultado Escenarios más probables
PCR Débil (Ct>35) El animal se infectó recientemente y aún no ha seroconvertido (<7 días). Los signos clínicos pueden no ser evidentes.
Ab-ELISA Negativo
IPT Negativo
PCR Positivo El animal se infectó recientemente, tiene signos clínicos y está iniciando la seroconversión (7-10 días).
Ab-ELISA Negativo
IPT Positivo
PCR Positivo

a) Infección en curso. El animal sigue virémico con signos clínicos y ya ha seroconvertido (> 10 días).

b) Reinfección de un animal con anticuerpos preformados de una infección previa (cerdo recuperado, superviviente). El título de IPT ofrecerá información sobre el momento de la infección.

Ab-ELISA Positivo
IPT Positivo
PCR Débil (Ct>35) o Negativo

a) Infección anterior. El animal se ha recuperado de una infección aguda o subaguda y puede que no presente signos clínicos.

b) El animal se infectó con una cepa atenuada (con o sin signos clínicos).

c) Reinfección de un animal con anticuerpos preformados de una infección previa (cerdo recuperado, superviviente). El título de IPT ofrecerá información sobre el momento de la infección.

Ab-ELISA Positivo
IPT Positivo

PCR

  • Positivo: El virus está presente; infección actual.
  • Negativo: Negativo o el virus no se detecta si la prueba se realiza mucho después de la infección.

HAT

  • Positivo: El virus está presente; infección actual.
  • Negativo: Negativo, infección con una cepa no hemadsorbente o el virus no se detecta si la prueba se realiza mucho después de la infección. Se debe confirmar el negativo mediante PCR.

Ag-ELISA

  • Positivo: El virus está presente; infección actual.
  • Negativo: Negativo, virus presente pero en concentraciones bajas o el virus no se detecta si la prueba se realiza mucho después de la infección. Se debe confirmar el negativo mediante PCR.

Ab-ELISA

  • Positivo: Anticuerpos maternales o exposición anterior (>7-10 días) a virus campo.
  • Negativo: Negativo o infección a virus de campo demasiado reciente para ser detectada.

IFA

  • Positivo: Anticuerpos maternales o exposición anterior (>7-10 días) a virus campo.
  • Negativo: Negativo o infección a virus de campo demasiado reciente para ser detectada.

IPT

  • Positivo: Anticuerpos maternales o exposición anterior (>7-10 días) a virus campo.
  • Negativo: Negativo o infección a virus de campo demasiado reciente para ser detectada.

Escenarios

Es importante tener en cuenta que algunos países pueden exigir la aprobación de la autoridad competente antes de poder realizar cualquier prueba de PPA.

Sospecha de brote agudo de PPA en cerdos de cualquier edad

  • Recoge sangre de varios animales afectados y analízala mediante PCR; se puede considerar agrupar muestras.
  • Recoge bazos y tonsilas de cerdos muertos y analízalos mediante PCR; se puede considerar agrupar muestras.

Foto 1. Toma de muestras en caso de sospecha de PPA. Foto por cortes&iacute;a de la Dra. Nadezhda Konovalova.

Foto 1. Toma de muestras en caso de sospecha de PPA. Foto por cortesía de la Dra. Nadezhda Konovalova.

Sospecha de circulación crónica de PPA en cerdos de cualquier edad sin mortalidad

  • Recoge sangre de 30 cerdos con signos clínicos (muestreo dirigido) o seleccionados aleatoriamente (sin signos clínicos) y analízala mediante PCR (se puede considerar agrupar muestras) e individualmente mediante Ab-ELISA.

Comentarios del artículo

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12-oct-2021daliarp1948daliarp1948Necesito ayuda con relacion a adquirir kits para la deteccion del virus por inmunoperoxidasa e inmunofluorescencia que firma me recomienda en estos momentos. Nesecitamos estar preparados
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