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El virus de la peste porcina africana (VPPA) es un patógeno altamente transmisible que afecta a los cerdos y provoca una enfermedad devastadora con una elevada mortalidad en poblaciones susceptibles. Ante las importantes repercusiones económicas que podría ocasionar un brote de PPA, Estados Unidos ha destinado bastantes recursos a proteger su sector porcino frente a esta amenaza. Los brotes de PPA que continúan activos en República Dominicana y Haití suponen un riesgo adicional para el sector porcino estadounidense, debido a su proximidad y a los desplazamientos hacia y desde Norteamérica. Aunque los programas de vigilancia se encuentran activos, durante los brotes la disponibilidad de pruebas rápidas, con niveles de sensibilidad y especificidad de las pruebas de laboratorio (como la PCR en tiempo real, rtPCR), es limitada. No obstante, los sistemas de diagnóstico recientemente desarrollados basados en CRISPR-Cas podrían ofrecer resultados comparables de elevada calidad.
Objetivo y métodos: En este estudio se desarrolla un método visual y de bajo coste para la detección del VPPA mediante una técnica CRISPR-Cas12a dependiente de amplificación por polimerasa recombinasa (RPA), que pueda utilizarse como prueba rápida en condiciones de campo.
Resultados: La prueba CRISPR-Cas12a presentó una sensibilidad y especificidad comparables a las de la rtPCR, tanto visualmente como mediante cuantificación con un lector de fluorescencia. En todas las muestras de sangre procedentes de casos sospechosos o negativos a VPPA, la prueba CRISPR alcanzó una sensibilidad del 98,3% (102 copias de ADN) y una especificidad del 100%. Los resultados de la prueba RPA-CRISPR pudieron visualizarse en tan solo 7 minutos, alcanzándose el pico de fluorescencia a los 40 minutos (pasos RPA y CRISPR).
Conclusión: Estos resultados sientan las bases para evaluar a gran escala el uso de una prueba rápida para la detección del VPPA en campo y ofrecen un procedimiento fiable y aplicable a muestras utilizadas habitualmente para el diagnóstico.
Kambakam S, Thomas J, Robbe-Austerman S, Shanmuganatham K, Palinski R. Rapid identification of African swine fever virus in diagnostic samples using CRISPR-Cas. J Vet Diagn Invest. 2026 Mar 25:10406387261432985. doi: 10.1177/10406387261432985. Epub ahead of print. PMID: 41882914; PMCID: PMC13021537.
