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Ingeniería de precisión para la resistencia al PRRSV

Los macrófagos de cerdos con el genoma editado que carecen del dominio SRCR5 en el gen CD163 son totalmente resistentes a ambos genotipos de PRRSV mientras que mantienen la función biológica.

Miércoles 1 marzo 2017 (hace 28 días)

El PRRSV presenta un tropismo de célula huésped estrecho, limitado a las células del linaje monocitos/macrófagos. El CD163 ha sido descrito como un receptor de fusión del PRRSV, por lo que la región de este receptor scavenger con dominio rico en cisteína-5 (SRCR5) ha demostrado ser un sitio de interacción para el virus in vitro. El CD163 se expresa a elevados niveles en la superficie de los macrófagos, en particular en el sistema respiratorio.

Aquí se describe la aplicación de CRISPR/Cas9 en cigotos porcinos resultando en la generación de cerdos con una deleción del exón 7 del gen CD163, codificando para SRCR5. La supresión de SRCR5 no mostró efectos adversos en los cerdos mantenidos en condiciones de cría estándar, observándose índices de crecimiento normales y recuentos sanguíneos completos. Los macrófagos alveolares pulmonares (PAM) y los monocitos de sangre periférica (CMSP) aislados de los animales se evaluaron in vitro. Ambos macrófagos PAM obtenidos a partir de PBMCs con estimulación CSF1 (PMMs) mostraron la característica diferenciación y expresión del marcador de superficie celular de los macrófagos de los respectivos orígenes. Se confirmó la expresión y el plegamiento apropiado de la deleción SRCR5 de CD163 en la superficie de los macrófagos y la actividad biológica de la proteína como hemoglobina-haptoglobina. El desafío de PAMs y PMMs con el PRRSV del genotipo 1 subtipos 1, 2 y 3 y de PMMs con el genotipo 2 mostraron completa resistencia a las infecciones virales evaluado por la replicación. La microscopía confocal mostró la falta de estructuras de replicación en los macrófagos de deleción SRCR5 CD163, lo que indica la inhibición de la infección antes de la expresión génica.

Christine Burkard, Simon G. Lillico, Elizabeth Reid, Ben Jackson, Alan J. Mileham, Tahar Ait-Ali, C. Bruce A. Whitelaw, Alan L. Archibald. Precision engineering for PRRSV resistance in pigs: Macrophages from genome edited pigs lacking CD163 SRCR5 domain are fully resistant to both PRRSV genotypes while maintaining biological function. PLOS. February 23, 2017. http://dx.doi.org/10.1371/journal.ppat.1006206

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