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3 Optimización de la técnica PCR para el diagnóstico de enfermedad edematosa en cerdos

Cepas patogénicas de E. coli causan la enfermedad edematosa en cerdos. El diagnóstico de la enfermedad endematosa se basa en los síntomas clínicos y en pruebas microbiológicas convencionales. El objetivo de este estudio fue de evaluar el uso de PCR en optimizar la detección de E. coli en cerdos infectados con la enfermedad edematosa. En el estudio se utilizaron cepas de E. coli positivas para la enfermedad edematos aislados de cerdos, y cepas de E. coli DH5 no patogénica y Klebsiella oxytoca. Se utilizó el métodos de recuento SERIAL DILUTION PLATE para determinar el número de células de E. coli. Se amplificó el ADN mediante el uso de iniciadores oligonucleotides específicos VT2.3/VT2.4 para dar un fragmento de ADN 663 bp. Se utilizó AGAROSE GEL ELECTROPHORESIS para visualizar las mezclas de ADN. Sólo se amplificaron las muestras de E. coli positivas a la enfermedad edematosa, las cepas E. coli no patogénica y K. ocytoca no se amplificaron. La concentración de ADN varía entre 10 ng a 1 picogram con la reacción positiva para la concentración ADN reducida a 10 pg. La reacción fue positiva desde un alto número de células hasta 100 células. Se puede concluir de este estudio que las técnicas PCR se optimizaron para el diagnóstico de la enfermedad edematosa sin perder la sensibilidad ni la especificidad, con el número mínimo de células para la amplificación utilizando iniciadores VT2.3/VT2.4 alrededor de 100 células. La reacción de amplificación se redujo a 10 pg de ADN y la amplificación posible después de transferencia directa de células de cultivos a mezclas de PCR.

Proceedings, International Pig Veterinary Society, 2000

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