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Diagnóstico laboratorial: Actinobacillus pleuropneumoniae (APP)

¿Qué métodos de diagnóstico laboratorial puedo usar para diagnosticar APP en cerdos? ¿Cuál debo elegir según la situación? ¿Cómo interpreto los resultados?

Test disponibles:

Patología macroscópica

  • Evalúa la presencia de lesiones en tejidos que pueden ser casi diagnósticas de la enfermedad.
  • Ubicación de las lesiones: pulmón.
  • Zonas de consolidación necrohemorrágica en el pulmón acompañadas de pleuritis fibrinosa (figura 1).
Figura 1: Lesiones pulmonares necrohemorrágicas típicas asociadas con la infección característica por APP. Fuente: ISU-VDPAM.

Figura 1: Lesiones pulmonares necrohemorrágicas típicas asociadas con la infección característica por APP. Fuente: ISU-VDPAM.

  • Pros:
    • El diagnóstico presuntivo puede realizarse tras un examen macroscópico de los pulmones.
  • Contras:
    • Actinobacillus suis puede causar algunas lesiones similares aunque menos graves.
    • No identifica el serotipo.

Cultivo bacteriano

  • Aislamiento de organismos vivos.
  • Tipos de muestras: pulmón.
  • Pros:
    • Puede realizarse en cualquier laboratorio (incluso interno).
    • Biotipo I requiere NAD (normalmente proporcionada por una colonia cultivada de Staphylococcus aureus).
    • Biotipo II no requiere NAD.
    • Coste relativamente bajo.
  • Contras:
    • No siempre fácil de cultivar.
    • No identifica el serotipo.
    • Si los cerdos han sido tratados previamente con antibióticos, esto puede impedir el crecimiento bacteriano.

Susceptibilidad antimicrobiana (antibiograma)

  • Test in vitro: capacidad de un organismo vivo para crecer bajo concentraciones específicas de diferentes antimicrobianos.
  • Tipos de muestras: pulmón.
  • Pros:
    • Identificación de susceptibilidad o resistencia de cepas específicas a antimicrobianos comunes.
    • Identificación de tendencias de resistencia a los antimicrobianos.
  • Contras:
    • Requiere un aislado bacteriano.
    • Las pruebas in vitro pueden diferir ligeramente de los resultados in vivo.
    • Es posible que algunos antimicrobianos específicos no se incluyan o requieran pruebas especiales separadas.
    • Coste moderado.

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) General o Serotipado

  • Detecta la presencia de secuencias específicas de ácido nucleico bacteriano (ADN).
  • Tipos de muestras: pulmón y tonsila.
  • Pros:
    • Sensibilidad alta.
    • General
      • Se dirige a los genes de la toxina ApxIV.
      • Presente en todos los serotipos de APP.
    • Serotipado
      • Se dirige a diferentes partes de los genes de las toxinas ApxI, ApxII y ApxIII.
      • Ver la tabla 1 para el serotipado y la producción de toxinas.
    • Coste moderado.
      • A menudo se pueden combinar muestras de tejidos para reducir el coste y minimizar la pérdida de sensibilidad.
  • Contras:
    • Requiere varios primers (cebadores) específicos para determinar el serotipo.
    • No todas las cepas se pueden tipificar.
      • Actualmente hay 19 serotipos identificados y este número seguirá aumentando.
    • No todas las pruebas están validadas para analizar muestras de tonsila.

Tabla 1: Producción de toxinas para cada serotipo.

Producción de toxinas
Serotipo ApxI ApxII ApxIII ApxIV
1 X X X
2 X X X
3 X X X
4 X X X
5 X X X
6 X X X
7 X X
8 X X X
9 X X X
10 X X
11 X X X
12 X X
13 X X
14 X X
15 X X X
16 X X X
17 X X
18 X X
19 X X

Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) Antígeno LPS-O

  • Detecta la presencia de anticuerpos.
  • Tipos de muestras: suero.
  • Objetivo: Antígeno LPS-O.
  • Pros:
    • Puede ser útil para ayudar con el serotipado.
    • Sensibilidad alta.
  • Contras:
    • Gran cantidad de reactividad cruzada entre serotipos debido a que comparten epítopos capsulares y de antígeno LPS-O.
      • Los siguientes serotipos presentan reacción cruzada debido a que comparten antígenos LPS-O:
        • Reacción cruzada entre los serotipos 1, 9 y 11.
        • Reacción cruzada entre los serotipos 3, 6, 8, 15, 17 y 19.
        • Reacción cruzada entre los serotipos 4, 7 y 18.
    • No determina el serotipo específico con una sola prueba.
    • Muy caro y poco práctico realizar pruebas para todos los serotipos.

Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) Antígeno ApxIV

  • Detecta la presencia de anticuerpos.
  • Tipos de muestras: suero.
  • Objetivo: Antígeno ApxIV.
  • Pros:
    • Sensibilidad alta.
    • Detecta todos los serotipos de APP.
  • Contras:
    • No determina el serotipo específico.
    • No determina la virulencia de las cepas.

Interpretación de resultados:

Patología macroscópica

  • Positivo: A menudo el diagnóstico presuntivo es suficiente.
  • Negativo: Sin lesiones pulmonares macroscópicas.

Cultivo bacteriano

  • Positivo:
    • Biotipo 1: dependiente de NAD.
    • Biotipo 2: independiente de NAD.
  • Negativo: Negativo o animal posiblemente tratado previamente con antibióticos.

Susceptibilidad antimicrobiana (antibiograma)

  • Susceptible: posible buena elección para el tratamiento si el antimicrobiano puede llegar al tejido diana.
  • Resistente: hay que seleccionar un antimicrobiano diferente.
  • MIC: si se realiza la MIC (mínima concentración inhibitoria) hay que asegurarse que el antimicrobiano seleccionado alcanza el valor MIC indicado en el órgano diana.

PCR

  • Positivo:
    • Organismo presente.
    • Puede identificar la presencia de diferentes genes que ayudan al serotipado.
  • Negativo:
    • Negativo o infección demasiado antigua.
    • Animal posiblemente tratado previamente con antibióticos.
    • No todas las cepas se pueden serotipar (no tipificable).

ELISA Antígeno LPS-O

  • Positivo: ayuda a determinar el serotipo o identificar un grupo de serotipos.
  • Negativo: negativo, infección demasiado antigua o animal posiblemente tratado previamente con antibióticos.

ELISA Antígeno ApxIV

  • Positivo: Organismo presente.
  • Negativo: negativo, infección demasiado antigua o animal posiblemente tratado previamente con antibióticos.

Escenarios:

Cerdos de engorde con muerte súbita o enfermedad respiratoria (aguda)

  • Necropsia 1-3 cerdos muertos recientemente o eutanasia cerdos con tos. Evalúa macroscópicamente los pulmones en busca de zonas de consolidación necrohemorrágica acompañadas de pleuritis fibrinosa.
  • Envía los pulmones afectados para cultivo bacteriano y pruebas PCR generales para APP y, si son positivas, realiza PCR de serotipado.

Establecer el estado negativo de la granja

  • Toma muestras de 30 de los cerdos de engorde más grandes de la granja y analízalos 2-3 veces al año usando ELISA ApxIV.

Consulta la "guía de enfermedades" para más información

AppLa pleuroneumonía por App es una enfermedad bacteriana con un gran impacto respiratorio. La producción de toxinas muchas veces causa una muerte súbita con hemorragia nasal.

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