Evaluación de una PCR múltiplex para la identificación simultánea de varios serotipos de Actinobacillus pleuropneumoniae
Jessing SG, Angen O, Inzana TJ. Evaluation of a multiplex PCR test for simultaneous identification and serotyping of Actinobacillus pleuropneumoniae serotypes 2, 5, and 6. J Clin Microbiol. 2003 Sep;41(9):4095-100.
13-nov-2003 (hace 20 años 6 meses 4 días)Con el objetivo de desarrollar una PCR múltiplex para la identificación simultanea y serotipificación de los serotipos 2, 5 y 6 de Actinobacillus pleuropneumoniae, investigadores daneses utilizaron regiones del DNA específicas del serotipo implicadas en la biosíntesis de los polisacáridos capsulares (región cps). Los primers específicos para los serotipos 2, 5 y 6 fueron combinados con primers específicos para la especie ya existentes utilizados en la PCR basada en el gen omlA. La PCR se evaluó utilizando cepas de serotipos de referencia de A. pleuropneumoniae así como 182 aislados de campo de Dinamarca suerotipados previamente mediante aglutinación con látex o inmunodifusión.
Para todas las cepas tipificables serológicamente se observó una correspondencia completa entre los resultados obtenidos mediante la PCR múltiplex y los obtenidos mediante los métodos de suerotipificación tradicionales. Por otro lado, los resultados de la PCR múltiplex permitieron que 6 de las 8 cepas no tipificables serológicamente se pudieran asignar a un serotipo. La especificidad del análisis se evaluó mediante la utilización de 93 cepas que representaban 29 especies diferentes dentro de la familia Pasteurellaceae así como especies encontradas normalmente en las zonas respiratorias de los cerdos. Todas estas cepas fueron negativas mediante la PCR múltiplex, incluidos 50 aislados de campo la especie Actinobacillus lignieresii relacionada filogenéticamente.
La utilización de la PCR múltiplex con cepas de campo danesas permitió identificar los serotipos de aproximadamente un 94% de las cepas aisladas de cerdos con enfermedad clínica. Más del 90% de los aislados con reacción cruzada en la prueba de aglutinación con látex pertenecían a los serotipos 2, 5 ó 6.
El estudio concluye que la PCR múltiplex es un método conveniente y específico para la serotipificación de A. pleuropneumoniae en laboratorios de diagnóstico.
Para todas las cepas tipificables serológicamente se observó una correspondencia completa entre los resultados obtenidos mediante la PCR múltiplex y los obtenidos mediante los métodos de suerotipificación tradicionales. Por otro lado, los resultados de la PCR múltiplex permitieron que 6 de las 8 cepas no tipificables serológicamente se pudieran asignar a un serotipo. La especificidad del análisis se evaluó mediante la utilización de 93 cepas que representaban 29 especies diferentes dentro de la familia Pasteurellaceae así como especies encontradas normalmente en las zonas respiratorias de los cerdos. Todas estas cepas fueron negativas mediante la PCR múltiplex, incluidos 50 aislados de campo la especie Actinobacillus lignieresii relacionada filogenéticamente.
La utilización de la PCR múltiplex con cepas de campo danesas permitió identificar los serotipos de aproximadamente un 94% de las cepas aisladas de cerdos con enfermedad clínica. Más del 90% de los aislados con reacción cruzada en la prueba de aglutinación con látex pertenecían a los serotipos 2, 5 ó 6.
El estudio concluye que la PCR múltiplex es un método conveniente y específico para la serotipificación de A. pleuropneumoniae en laboratorios de diagnóstico.