Uso de RNAs de referencia endógenos y exógenos para la detección cualitativa y cuantitativa del virus de PRRS en semen porcino
S Revilla-Fernandez, B Wallner, K Truschner, A Benczak, G Brem, F Schmoll, M Mueller, R Steinborn. The use of endogenous and exogenous reference RNAs for qualitative and quantitative detection of PRRSV in porcine semen. 2005. J Virol Methods. Vol. 126(1-2):21-30
03-jun-2005 (hace 18 años 11 meses 15 días)Se desarrolló un método para la detección cualitativa y cuantitativa
de RNA del virus de PRRS asociado a células seminales de verracos en relación
a RNAs de referencia endógenos y exógenos.
Como control endógeno para PCR a tiempo real (RT-PCR) se seleccionó RNAm UBE2D2 debido a su baja expresión en las células seminales. Esto lo convierte en un control ideal para las infecciones persistentes de PPRSV, con pocas copias de RNA vírico en semen. Para la cuantificación se añadió un RNA sintético a la reacción de aislamiento de RNA para extraer un número exacto de copias. Como control exógeno se utilizó la subunidad grande del gen de la ribulosa-1,5-bisfosfato carboxilasa/oxigenasa de Arabidopsis thaliana.
De modo inesperado, el RNA de PRRSV se detectó en una granja SPF que habían dado negativo en el test de ELISA para anticuerpos antiPRRSV. De este modo, la RT-PCR para PRRSV asociado a células seminales demuestra ser una herramienta muy válida para controlar el estatus SPF en cuarentenas o para investigaciones rutinarias.
Como control endógeno para PCR a tiempo real (RT-PCR) se seleccionó RNAm UBE2D2 debido a su baja expresión en las células seminales. Esto lo convierte en un control ideal para las infecciones persistentes de PPRSV, con pocas copias de RNA vírico en semen. Para la cuantificación se añadió un RNA sintético a la reacción de aislamiento de RNA para extraer un número exacto de copias. Como control exógeno se utilizó la subunidad grande del gen de la ribulosa-1,5-bisfosfato carboxilasa/oxigenasa de Arabidopsis thaliana.
De modo inesperado, el RNA de PRRSV se detectó en una granja SPF que habían dado negativo en el test de ELISA para anticuerpos antiPRRSV. De este modo, la RT-PCR para PRRSV asociado a células seminales demuestra ser una herramienta muy válida para controlar el estatus SPF en cuarentenas o para investigaciones rutinarias.