Diagnóstico laboratorial: Rotavirus

Existen tres grupos principales de rotavirus que causan diarrea en cerdos: Rotavirus A, Rotavirus B y Rotavirus C. Cada grupo de virus es diferente de los demás y requiere pruebas específicas diseñadas para ellos. La diarrea en cerdos a menudo implica infecciones con múltiples grupos de rotavirus al mismo tiempo.

Test disponibles:

Patología macroscópica

• Evalúa la presencia de adelgazamiento de la pared del intestino delgado que puede sugerir la presencia de enfermedad.
• Ubicación de las lesiones: yeyuno e íleon.
• Pros:
  • Resultados rápidos y económicos
  • Aplicable a los tres grupos de rotavirus
• Contras:
  • No diagnóstico – se pueden encontrar lesiones similares con otras enfermedades especialmente las infecciones por coronavirus (gastroenteritis transmisible, diarrea epidémica porcina y delta coronavirus porcino)
  • Requiere tejidos frescos (<15 min) ya que la descomposición cambia drásticamente la apariencia del intestino delgado
  • No distingue entre los diferentes grupos de rotavirus

Histopatología

• Evalúa la presencia de lesiones en los tejidos (atrofia en las vellosidades del intestino delgado) que pueden sugerir firmemente la presencia de enfermedad.
• Tipos de muestras: tejido del yeyuno e íleon.
• Pros:
  • Confirma la atrofia de las vellosidades que sugieren enteritis viral
• Contras:
  • Se necesita fijar con formol los tejidos intestinales en menos de 15 minutos tras la muerte del animal. El tejido intestinal se descompone rápidamente

Inmunohistoquímica (IHC)

• Detecta la presencia de antígeno viral.
• Tipos de muestras: tejido del yeyuno e íleon.
• Pros:
  • Diagnóstico definitivo: puede confirmar la presencia del virus con lesiones asociadas
• Contras:
  • Solo disponible actualmente para Rotavirus A y Rotavirus C (no disponible para Rotavirus B)

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

• Detecta la presencia de una secuencia específica de ácido nucleico viral (ARN)
• Tipos de muestras: tejidos intestinales de yeyuno e íleon, hisopos fecales, heces.
• Pros:
  • PCR Multiplex puede detectar diferentes grupos de rotavirus, incluyendo Rotavirus A, Rotavirus B y Rotavirus C
  • Alta sensibilidad.
  • Cuantificación por PCR
  • Costo moderado
    • A menudo se pueden agrupar muestras de heces o tejidos para reducir el costo y minimizar la pérdida de sensibilidad (especialmente en lo que respecta a la relevancia clínica).
• Contras:
  • Alta sensibilidad – puede confirmar la presencia del virus pero no la enfermedad (alta prevalencia del virus en el medio ambiente)

Aislamiento del virus

• Aísla el virus vivo.
• Tipos de muestras: tejidos intestinales de yeyuno e íleon, hisopos fecales, heces.
• Pros:
  • Aislamiento del virus para utilizarlo en el desarrollo de vacunas (vacunas autógenas)
• Contras:
  • Caro
  • Resultados lentos
  • Solo disponible actualmente para Rotavirus A y no para Rotavirus B o Rotavirus C
  • A menudo difícil de cultivar (muchos falsos negativos)
  • La manipulación de las muestras desde el campo hasta el laboratorio puede afectar a la supervivencia del virus

Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA)

• Detecta la presencia de anticuerpos.
• Tipos de muestras: suero.
• Pros:
  • Los animales permanecen positivos durante varias semanas
  • Puede identificar granjas negativas
• Contras:
  • La alta prevalencia del virus en el medio ambiente resulta en una exposición común en muchos/mayoría de cerdos
  • Requiere una prueba específica para cada grupo de rotavirus
  • No hay protección cruzada entre los diferentes grupos de rotavirus

Tabla 1. Resumen de las pruebas aplicables con respecto a los diferentes grupos de rotavirus.

	Rotavirus A	Rotavirus B	Rotavirus C	¿Permite diferenciar entre grupos?
Patología macroscópica	Sí	Sí	Sí	No
Histopatología	Sí	Sí	Sí	No
Inmunohistoquímica (IHC)	Sí	No	Sí	Sí
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)	Sí	Sí	Sí	Sí
Aislamiento del virus	Sí	No	No	No
Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA)	Sí	No	No	No

Interpretación de resultados:

Patología macroscópica

• Positivo: Confirmación preliminar de la presencia de adelgazamiento intestinal.
• Negativo: Los casos tempranos o leves pueden no manifestar lesiones intestinales extensas.

Histopatología

• Positivo: Confirmación de enfermedad, per no de la causa de la enfermedad.
• Negativo: Negativo o las lesiones no se detectan si se analiza una muestra incorrecta o se realiza mucho después de la infección.

IHC

• Positivo: El virus está presente en el sitio de la lesión.
• Negativo: Negativo o el virus no se detecta si la prueba se realiza mucho después de la infección o la concentración de virus es demasiado baja (sólo está presente por un corto período de tiempo).

PCR

• Positivo: Confirmación de presencia de los diferentes grupos de rotavirus (A, B y C).
• Negativo: Negativo, el virus no se detecta si la prueba se realiza mucho después de la infección o por una selección o manipulación incorrecta de la muestra.

Aislamiento del virus

• Positivo: Confirmación de presencia del virus pero no de enfermedad.
• Negativo: Negativo, el virus no se detecta si la prueba se realiza mucho después de la infección o simplemente no puede crecer debido a otra contaminación o una mala manipulación (presente pero muy difícil de cultivar). No detecta Rotavirus B o Rotavirus C.

ELISA

• Positivo: Exposición anterior (> 2-4 semanas) a vacuna o virus de campo. Sin asociación de positividad y enfermedad.
• Negativo:
  • Negativo a vacuna o virus de campo
  • Infección demasiado reciente para ser detectada

Escenarios:

Lechones recién nacidos con diarrea (aguda o crónica)

• Recoge muestras fecales de 10 o más cerdos con diarrea no tratados y envíalas para analizar mediante PCR para Rotavirus A, Rotavirus B y Rotavirus C en pools de 5.
• Necropsia 1-3 cerdos muertos recientemente o eutanasia cerdos con diarrea. Evalúa macroscópicamente el yeyuno e íleon en busca de adelgazamiento de la pared intestinal. Recoge muestras y fíjalas en formol para histopatología y IHC.

Lechones recién destetados con diarrea (aguda o crónica)

• Recoge muestras fecales de 10 o más cerdos con diarrea no tratados y envíalas para analizar mediante PCR para Rotavirus A, Rotavirus B y Rotavirus C en pools de 5.
• Necropsia 1-3 cerdos muertos recientemente o eutanasia cerdos con diarrea. Evalúa macroscópicamente el yeyuno e íleon en busca de adelgazamiento de la pared intestinal. Recoge muestras y fíjalas en formol para histopatología y IHC.