Предварительный выбор пола приплода, используя сортировку сперматозоидов-носителей Х или У хромосом методом проточной цитометрии

В то время, как сексированное семя уже давно используется при выращивании КРС, в воспроизводстве других животных (включая свиней) технология сексирования все еще находится на экспериментальной стадии. Главной целью данной работы была разработка технологии по эффективному использованию поточной цитометрии для сексирования семени хряков.

Для решения этой задачи были проведены следующие исследования:

• Во время первого из них оценивалась способность сперматозоидов, содержавшихся в эякуляте каждого из хряков, выдержать процедуру сортировки методом проточной цитометрии.
• Второе было направлено на оптимизацию процедуры криоконсервации сексированного семени. Во время него мы оценивали, как стандартная технология криоконсервации влияет на способность сексированного семени, замороженного при низкой концентрацией сперматозоидов, к оплодотворению ин витро, а также влияние различных конечных концентраций глицериновой среды на качество после разморозки.
• Целью третьего экспериментального исследования было разработать адекватную технологию работы с семенем хряка в процессе сексирования и после него, с тем, чтобы получать сексированное семя с оптимальными характеристиками для оплодотворения ин витро. Для этого было выполнено изучение различных аспектов процедуры сексирования и проведена оценка, насколько сильно влияют на качество сексированного семени высокие степени его разбавленности, тип используемой при его сборе среды, а также состав проточной жидкости. Качество семени оценивалось по тестам на подвижность и жизнестойкость, а его функциональность – по результатам полученных в процессе оплодотворения ин витро количественных данных, таких, как степени пенетрации и полиспермии, а также среднее количество сперматозоидов, проникших в каждую яйцеклетку.
• В процессе четвертого исследования была проведена разработка надежной технологии лапароскопического осеменения сексированным семенем, позволяющей получать оптимальные результаты в условиях реальной фермы. Было оценено, как на репродуктивные показатели свиноматки влияют одинарное (фаллопиева труба) и двойное (фаллопиева труба и окончания рогов матки) лапароскопическое осеменение сексированным семенем.

По результатам этих четырех исследований были сделаны следующие заключения:

Устойчивость хряков к процедуре сексирования семени методом поточной цитометрии варьируется и носит индивидуальный характер. Реакция сперматозоидов на какую-либо одну технологию обработки семени не дает возможности предсказать реакцию таких же сперматозоидов от того же самого хряка на другую технологию. Замораживание семени, разбавленного до низкой концентрации, в комбинации с использованием глицериновой среды с ее доведением до концентрации 0,5-1%, может стать приемлемым методом криоконсервации сексированного семени хряков. Добавление в проточную жидкость ЭДТК, а в среду, используемую при сборе – ЯЖ, повышало фертильную способность сексированного семени, так что, при проведении сексирования свиного семени методом проточной цитометрии оба этих агента следует использовать в качестве необходимых компонентов среды. Технология лапароскопического осеменения, описанная в данной работе, является эффективным методом получения поросят желаемого пола и может быть использована в условиях реальной фермы. Двойное лапароскопическое осеменение, при котором на свиноматку используется от 3 до 6 миллионов отсортированных по полу сперматозоидов, дает приемлемый результат с точки зрения параметров воспроизводства и делает технологию сексирования семени потенциально применимой в работе подразделений по производству элитного племпоголовья.