клинический случай: Неспособность к оплодотворению

Знакомство с фермой
Это кооператив, у которого 2 производственных модуля поросят (ПМП) и центр искусственного осеменения (ЦИО), расположенные в штате Парана (Бразилия). Производственные модули расположены в 60 км друг от друга, а ЦИО в 35 км от ПМП 1 и в 60 км от ПМП 2 (рис. 1).

Рисунок 1. Расстояние между фермерскими производственными модулями поросят и центром искусственного осеменения.

В марте 2011 года составлен отчет руководителей обоих ПМП, который отразил увеличение отторжений у самок (от 17 до 28 дней, супоросных и ремонтных, с частотой отторжений в 22%) со слизистыми от белого до коричневого (шоколадного) вулговагинальными выделениями спустя несколько часов после искусственного осеменения. Наиболее высокий уровень заболеваемости произошел у ремонтных свинок, но это также затронуло повторнородящих свиноматок. Свиноматки после отъёма поросят находятся в боксах с контролируемой температурой 21°C и относительной влажностью воздуха 60 - 70%, и содержатся на той же территории, по крайней мере, в первые 7 - 8 недель беременности.

Эта проблема возникла на двух фермах. Для мер биологической безопасности сначала был нанесён визит в ЦИО, а затем в оба ПМП согласно протоколам консалтинговой фирмы. Первые клинические подозрения, возникли с наличием микотоксинов, так что компания - производитель кормов взяла пробы, провела наблюдения и дала количественную оценку. Они ничего не нашли в сырье.

Состояние здоровья

На обоих ПМП животные показали негативную серотологическую реакцию на вирус свиного репродуктивного и респираторного синдрома и на вирус Ауэски, но положительную реакцию в отношении микоплазменной пневмонии. Были предприняты соответствующие меры биологической безопасности, которые обеспечивают хороший контроль заболеваемости с низкой степенью клинических признаков, указывающих на наличие острых или хронических заболеваний.

Пополнение на коммерческих фермах начинается с приобретения отъемышей чистокровных разнопородных самок от производителя, который имеет своих собственных прапрародителей и свиноматок во втором поколении, и получения генетического материала, который соответствует основам генетического улучшения, производится путем приобретения семени хряка второго и третьего поколения по существующей программе. ЦИО компании производит 7,500 доз в месяц.

Центр искусственного осеменения

ЦИО является современным и полуавтоматизированным, использующим отходы в производственных процессах. Хряки свободны от антител вирусов свиного репродуктивного и респираторного синдрома, Ауэски, лептоспироза, бруцеллёз, и прививаются каждые 6 месяцев против свиной краснухи, лептоспироза и парвовирусов. Они размещаются в 7,5 - метровом загоне с заданной температурой в 21°C (диапазон между максимумом и минимумом 4 - 6°C), с относительной влажностью 60-70% и 12 – 14 - часовым освещением.

В манеже для взятия спермы есть сточная впадина и лабораторные секции, которые соответствующим образом разделены на чистую, грязную и промежуточную зоны. В самой лаборатории используется вода, добываемая при помощи установки обратного осмоса с целью производства доз. Все оборудование – это нержавеющая сталь, одноразовые материалы, используемые для обработки спермы. Дозы упаковываются автоматически в пластиковые трубки.

Экскурсия на производственный объект

В ходе визита в ЦИО были взяты пробы воды, чистой и разбавленной спермы, а также материалы, которые являются частью производства и распределения доз семени, как показано в таблице 1, с соответствующими результатами.

Таблица 1. Бактериология.

Проба	UFC/мл – Возбудитель
Вода, недавно прошедшая через установку обратного осмоса	Нет культивирования
Вода, собранная из гомогенизатора с разбавителями	36 КОЕ
Вода с разбавителями на пластинках для микробиологического анализа	Культивирование и выделение комплекса бактерий Burkholderia cepacia
Вода с разбавителями	Культивирование и выделение комплекса бактерий Burkholderia cepacia
Баллон гомогенизатора / Спираль	Культивирование и выделение комплекса бактерий Burkholderia cepacia
Пробирка для сбора образцов – Блистер	Нет культивирования
Контейнер для дозатора	Нет культивирования
Поилка	10 КОЕ
Наконечник дозатора	Нет культивирования

(КОЕ) колониеобразующие единицы

Таблица 2. Бактериология в разбавленной сперме

Проба	Выделенный возбудитель
Разбавленная сперма - 1	Burkholderia cepacia
Разбавленная сперма - 2	Burkholderia cepacia
Разбавленная сперма -3	Burkholderia cepacia
Разбавленная сперма - 4	Burkholderia cepacia

Результаты

Таким образом, было проверено, что имело место предшествующее заражение в резервуаре гомогенизатора (в спирали и одноразовом пластиковом обёрточном мешке резервуара). Заражение также было установлено в дозах, производимых в это же время, из - за высокого сосредоточения в резервуаре (пластиковый мешок и пропеллер) того же вида штамма бактерий, что и в ёмкости для разбавления.

1-е Заключение: Одноразовый пластиковый пакет резервуара обновлялся всего раз в неделю. Рекомендуется замена всех одноразовых материалов после производства каждой дозы.

Посещение фермы (ПМП 1)

В ходе посещения ПМП 1 были взяты пробы из первой мочи, отбрасывая первые капли и собирая только среднюю порцию в стерильные контейнеры и поддерживая основные гигиенические меры предосторожности на протяжении всей процедуры. Материал был немедленно подготовлен и был охлаждённым направлен для лабораторной обработки.

Было отмечено, что 15% проб мочи показали бактериальную культуру Burkholderia cepacia. Это бактерия, которая часто встречается в почве, воде и может жить в течение длительного времени в условиях повышенной влажности. Некоторые исследования связывают наличие Burkholderia cepacia для людей с муковисцидозом, наличествующим в респираторных заболеваниях.

Также ремонтная свинка с обильным присутствием вульвовагинального секрета была выбрана таким образом, что в клинической оценки все параметры показали нормальное физиологическое состояние без признаков потери аппетита или лихорадки (ректальная температура была 38.7°C). Единственным клиническим наблюдением было наличие слизи и наличие уретральных нитей, и гиперемии в слизистой влагалища. Свиноматка была недавно оплодотворена (получили первую дозу спермы в течение утра и продолжали собирать пробы в конце дня).

Рисунок 1. На снимках показаны влагалищные секреции.

Были взяты мазки секреций для определения бактерий. Результаты показаны в следующей таблице:

Таблица 3. Результаты бактериального выделения.

Проба	Выделенный возбудитель
Слизистая влагалища	Культивирование и выделение Burkholderia cepacia
Слизистая шейки матки	Культивирование и выделение Burkholderia cepacia
Слизистая оболочка матки	Культивирование и выделение Burkholderia cepacia
Слизистая оболочка мочевого пузыря	Нет культивирования

Рисунок 2. Воспроизводительный тракт ремонтной свинки.

Рисунок 3. Раскрывание шейки матки для сбора секрета мазком.

Рисунок Наличие слизи в слизистой шейки матки и в слизистой оболочке матки.

Рисунок. Мочевой пузырь без макроскопических изменений

Другие недавно осеменённые самки с теми же клиническими симптомами были выбраны для сбора мазков вульвовагинальных секреций с использованием одноразовых расширителей для лучшего открывания слизистой влагалища и глубокого проникновения мазка. Мы выбрали первородящих самок с одинаковыми клиническими признаками и завершённым осеменением, чтобы отправить их на убой и подвергнуть некропсии. Мы полностью извлекли половой проток и, вскрыв его, взяли пробы гнойной слизи из шейки матки, влагалища и рога матки для получения бактериальной культуры.

2-е Заключение: IВо всех собранных материалах для получения бактерий был обнаружен тот же вид бактерий: Burkholderia cepacia.

Управленческие стратегии, которые были предприняты:

1. Прибегая к лекарственному лечению, использовать инъекции цефтиофура для свиноматок с проблемами;
2. Отказаться от использования свиноматок, у которых наблюдаются повторы с выделениями;
3. Принять процедуру автоклавирования всех загрязненных лабораторных материалов;
4. Использовать одноразовый мешок в ёмкости для разбавления каждый день.
5. Увеличить медицинский контроль основного персонала и лабораторных средств, начать использовать одноразовые маски при подготовке доз семени;
6. Посещение центра и ферм каждые 15 дней, собирая материал на всех стадиях производственного процесса семени, пока не восстановятся нормальные условия;
7. Избегать хранения доз спермы более чем 72 часа;
8. Проблема была решена в лаборатории в течение трёх недель, но потери продолжались 10 недель.

Растворитель, который использовался, содержал антибиотики, но бактерии были устойчивы, как показано в антибиограмме, и, как показано в следующей таблице. Также было предложено добавление к разбавителям антимикробных молекул, чувствительных к B. cepacia.

Таблица 4. Антибиограмма - RG 131

Антибиотики	Burkholderia cepacia (вода с разбавителем)		Burkholderia cepacia (сперма разбавлена на 88645)
	Зона подавления	Чувствительность	Зона подавления	Чувствительность
Амоксициллин 10 мкг	6 мм	С	6 мм	С
Ампициллин 10 мкг	6 мм	С	6 мм	С
Апрамицин 15 мкг	16 мм	Ч	16 мм	Ч
Цефтиофур 30 мкг	26 мм	Ч	26 мм	Ч
Колистин 10 мкг	6 мм	С	6 мм	С
Энрофлоксацин 5 мкг	26 мм	Ч	26 мм	Ч
Спектиномицин + Линкомицин 100+9 мкг	14 мм	С	14 мм	С
Флорфеникол 30 мкг	16 мм	П	16 мм	П
Гентамицин 10 мкг	6 мм	С	6 мм	С
Неомицин 30 мкг	6 мм	С	6 mm	С
Норфлоксацин 10 мкг	>30 мм	Ч	>30 мм	Ч
Пенициллин G 10 мкм	6 мм	С	6 мм	С
Сульфазотрим 25 мкг (Сульмафетацин+Триметропим)	6 мм	С	6 мм	С

УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ: S = Чувствительный, R = Стойкий, I = Промежуточный

Метод: диффузия в агаре

Ссылка: ИКЛС (Институт клинических и лабораторных стандартов)