Соскоб с миндалин как инструмент для мониторинга хронических носителей вируса РРСС

Вирус РРСС выделяется инфицированным животным через нос, слюну, мочу, фекалии, кровь, молоко и сперму, а продолжительность периода выделения варьируется в зависимости от типа выделений, возраста животного, его иммунного статуса и конкретного штамма РРСС. Вирус может длительное время сохраняться в лимфоидной ткани (сообщалось о случаях до 251 дня после инфицирования миндалин), даже спустя месяцы после исчезновения виремии.

В программе контроля РРСС крайне важно выбирать типы образцов и методы отбора проб, позволяющие выявлять животных-носителей на заключительной стадии выделения вируса, при этом предпочтительными образцами являются лимфоидная ткань и слюна.

Разработка методов отбора проб ротовой жидкости стала значительным шагом вперед в повышении возможностей обнаружения, особенно в ситуациях низкой распространенности и на заключительных стадиях инфекции. Однако наличие ингибиторов в таких образцах требует оптимальной консервации образцов перед проведением ОТ-ПЦР. Кроме того, значения CT часто высоки, что ограничивает возможность получения вирусной последовательности.

Описанный несколько лет назад метод соскоба миндалин имел существенный недостаток: он требовал абразивного воздействия на миндалины для получения миндалинного экссудата, которое выполнялось с помощью таких инструментов, как ложки, что затрудняло его практическое применение на живых животных. В 2024 году Пэн Ли (Университет Айовы) опубликовал адаптированный метод соскоба, представляющий собой менее инвазивную технику, называемую скрабированием миндалин, которая показала более высокую эффективность в обнаружении вируса по сравнению с сывороткой крови инфицированных свиноматок.

Впоследствии этот метод был протестирован на нескольких фермах в регионах Арагон и Каталония в Испании в соответствии с протоколом, описанным Пэн Ли (2024), с некоторыми модификациями. Также использовались катетеры для искусственного осеменения с губчатыми наконечниками, как описано Пэн Ли, но были внесены следующие изменения:

• К кончику катетера не была прикреплена марлевая салфетка.
• Во время взятия образцов животное было зафиксировано, чтобы облегчить прямое взятие образцов из миндалин, что было бы затруднительно при перемещении животных.
• Образцы собирались в пробирки Falcon для обработки.

Исследование проводилось на двух типах ферм:

• Фермы по откорму поросят, заразившихся естественным путем в период доращивания.
• Ферма со свинками, ранее заразившимися естественным путем в период доращивания, с целью выявления хронических носителей и предотвращения занесения вирусов при их переводе на коммерческие фермы.

На первой ферме в качестве эпидемиологической единицы рассматривался станок. Из каждого станка отбирали по пять животных для одновременного взятия образцов крови и соскоба миндалин, а также группового образца ротовой жидкости.

Целью исследования было оценить способность к обнаружению (отсутствие или наличие) на групповом уровне с помощью объединенных образцов крови, соскоба миндалин и ротовой жидкости.

На двух других фермах брали индивидуальные образцы сыворотки, соскобы с трахеобронхиальной ткани и промывания миндалин, а результаты анализа сравнивали по животным.

Все образцы анализировались с использованием ОТ-ПЦР, при этом значения cT < 40 считались положительными. Также сравнивалась степень положительности (вирусная нагрузка) каждого типа образцов.

Результаты показали, что при взятии соскобов с миндалин выявлялась более высокая доля положительных на вирус РРСС групп (100%), чем при взятии соскобов с рото-миндалин в возрасте 140 дней, и по сравнению с результатами, полученными с сывороткой и ротовой жидкостью (66,6%). Кроме того, положительные образцы соскобов с миндалин имели более низкое среднее значение cT (30,7) по сравнению с сывороткой (35,6) и ротовой жидкостью (35,5).

показатель выявления вируса РРСС

Тип образца	10 недель	20 недель
Кровь	100%	65.51%
Ротовая жидкость	100%	65.51%
Соскоб с миндалин		100%

Среднее значение cT для вируса РРСС

Тип образца	10 недель	20 недель
Сыворотка	23.16	35.67
Ротовая жидкость	27.00	37.00
Соскоб с миндалин		30.67

В исследовании, проведенном на хронически инфицированных животных, показатели выявления были выше в образцах, полученных при обработке миндалин (61,5%), по сравнению с образцами сыворотки (7,7%) и соскобами из трахеобронхиальной области (30,8%). Средняя вирусная нагрузка в положительных образцах была выше в образцах, полученных при обработке миндалин и промывании трахеобронхиальной области (cT 34,1 и 33,0 соответственно), чем в немногочисленных положительных образцах сыворотки (cT 36,0).

Образец	Отрицат	Положит	Значение cT
Соскоб из трахеобронхиальной области	50 (33.56%)	4 (30.77%)	33.50
Очистка миндалин	46 (30.87%)	8 (61.54%)	34.13
Сыворотка	53 (35.57%)	1 (7.69%)	36.00

Эта новая методика отбора проб может стать полезным инструментом для лучшего понимания динамики инфекции у свиноматок, зараженных вирулентными штаммами, учитывая длительное выделение вируса, которое можно наблюдать, особенно во время опороса, и их потенциальную роль в передаче вируса потомству.

В ближайшем будущем будет оценена его полезность в других сценариях, таких как акклиматизация свиноматок, устранение животных-носителей в программах искоренения заболеваний, а также его способность обнаруживать и отслеживать другие патогены, такие как Mycoplasma hyopneumoniae или вирус свиного гриппа.