Лабораторная диагностика: Ящур

Доступные исследования

Общая патология

• Выявление поражений, особенно пузырьков в области рыла и лап
• Плюсы:
  • Макроскопически легко определить везикулы
• Минусы:
  • Клинически неотличим от всех других везикулярных заболеваний
  • Обычно требует других диагностических подтверждений

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

• Выявляет наличие специфической последовательности вирусной нуклеиновой кислоты (РНК)
• Типы образцов: везикулярная жидкость или эпителий (предпочтительный тип образца), сыворотка, образец из пищевода и глотки (при отсутствии везикул или эпителия), молоко
• Плюсы:
  • Самый чувствительный и предпочтительный метод обнаружения возбудителя
  • Часто позволяет объединять образцы, что снижает затраты и минимизирует потерю чувствительности
  • Может быть направлен на универсальные белки для общего обнаружения или на серотип-специфические белки для серотипирования
• Минусы:
  • Умеренная стоимость
  • Требуются подходящие праймеры, особенно при работе со структурными белками, специфичными для серотипов.

Список известных в настоящее время серотипов ящура (перекрестной защиты между серотипами нет):

• Азия 1
• Южноафриканский Тип 1 (SAT 3)
• Южноафриканский Тип 1 (SAT 2)
• Южноафриканский Тип 1 (SAT 1)
• C
• A
• O

Иммуноферментный анализ на антиген (Ag-ELISA)

• Обнаруживает наличие антигена
• Типы образцов: везикулярная жидкость или эпителий (предпочтительный тип образца), сыворотка, образец из пищевода и глотки (при отсутствии везикул или эпителия), молоко
• Плюсы:
  • Предпочтительный метод обнаружения и идентификации серотипа
  • Может использоваться для диагностики на уровне отдельного животного или стада
  • Может использоваться для дифференциации серотипов
  • Любой положительный результат на вирус дикого типа считается значимым

Таблица 1. Различные вирусные белки могут быть использованы для решения диагностических задач

Целевой антиген	Изменчивость	Использовать
Структурные белки	Переменная	Серотипирование
Неструктурные белки	Сохраненный	Универсальное обнаружение: неспецифическое для определенного серотипа

• Минусы:
  • Наличие вирусного антигена может быть серотип-специфичным.
  • Может потребоваться проведение нескольких тестов для определения серотипов.

Иммуноферментный анализ антител (АТ-ИФА)

• Выявляет наличие антител
• Типы образцов: сыворотка
• Плюсы:
  • Циркулирующие антитела можно обнаружить уже через 3–5 дней после появления клинических признаков.
  • У животных сохраняется положительный результат в течение нескольких месяцев.
  • Может использоваться в случаях заболевания в поздней стадии.
  • Может использоваться для дифференциации воздействия дикого типа от некоторых убитых/рекомбинантных вакцин (целевые неструктурные белки).
  • Любой положительный результат на дикий тип вируса считается значимым.
• Минусы:
  • Выработка антител специфична к серотипу
  • Некоторые животные могут оставаться серопозитивными в течение нескольких лет
  • Сила иммунного ответа может варьироваться в зависимости от вирулентности штамма
  • Наличие антител не всегда коррелирует с защитой.

Анализ бокового потока (LFD)

• Обнаруживает наличие антигена
• Типы образцов: везикулярная жидкость или эпителий
• Плюсы:
  • Предпочтительный метод обнаружения и идентификации серотипа
  • Может использоваться для диагностики на уровне отдельного животного или поголовь
  • Может использоваться для дифференциации серотипов
  • Любой положительный результат на вирус дикого типа считается значимым
• Минусы:
  • Наличие вирусного антигена может быть серотип-специфичным.
  • Менее чувствителен, чем Ag-ELISA.
  • Может потребоваться проведение нескольких тестов для определения серотипов.

Выделение вируса (VI)

• Выделяет живой вирус
• Типы образцов: везикулярная жидкость или эпителий (предпочтительный тип образца), сыворотка, образец из пищевода и глотки (при отсутствии везикул или эпителия), молоко
• Плюсы:
  • Традиционный золотой стандарт
  • Изолировать вирус для использования при разработке вакцин (аутогенные вакцины) или серологического тестирования (ИФА) для определения серотипа.
  Минусы:
  • Дорого
  • Медленное получение результатов
  • Требуются специальные клеточные линии: клетки щитовидной железы быка (телят) или клетки почек свиньи, теленка или ягнёнка
  • Процесс инокуляции трудоёмкий
  • Часто сложно выращивать (ложноотрицательные результаты)

Генетическое секвенирование

• Секвенирует генетическую нуклеиновую кислоту (РНК) вируса
• Типы образцов: везикулярная жидкость или эпителий (предпочтительный тип образца), сыворотка, образец из пищевода и глотки (при отсутствии везикул или эпителия), молоко
• Плюсы:
  • Может помочь в молекулярной эпидемиологии
  • Помогает определить серотип
• Минусы:
  • Дорого
  • Медленно достигаются результаты

Интерпретация результатов

Макроскопические поражения (везикулы)

• Положительный результат: необходимо провести обследование на предмет возможного ящура.
• Отрицательный результат: отрицательный результат или пропущенный, если тестирование проводится поздно после заражения или при заражении лёгким штаммом.

ПЦР

• Положительный результат: вирус присутствует
• Отрицательный результат: вирус мог быть пропущен, если тестирование проводилось поздно после заражения

Ag-ELISA

• Положительный результат: вирус присутствует
• Отрицательный результат: вирус мог быть пропущен, если тестирование проводилось поздно после заражения или тест был проведен на неправильный серотип

Ab-ELISA

• Положительный результат: материнские антитела или контакт с диким вирусом или некоторыми вакцинами в прошлом (более 2–3 дней)
• Отрицательный результат: отрицательный результат или контакт с вакциной или диким вирусом был слишком ранним для обнаружения, или тест на антитела не того серотипа

LFD

• Положительный результат: вирус присутствует
• Отрицательный результат: вирус мог быть пропущен, если тестирование проводилось поздно после заражения или тест был проведен на неправильный серотип

VI

• Положительный результат: вирус присутствует
• Отрицательный результат: вирус мог быть пропущен, если тестирование проводилось поздно после заражения или использовалась неправильная линия клеток

Genetic Sequencing

• Положительный результат: вирус присутствует
• Отрицательный результат: вирус мог быть пропущен, если тестирование проводилось поздно после заражения или вируса было слишком мало для секвенирования

Сценарии

Важно отметить, что в некоторых странах для проведения любого тестирования на ящур может потребоваться разрешение федеральных органов.

Подозрение на острую вспышку ящура у свиней любого возраста и в поголовье, не вакцинированном против ящура.

• Соберите везикулярную жидкость у нескольких пораженных животных и протестируйте ее с помощью Ag-ELISA или ПЦР; для ПЦР можно рассмотреть возможность объединения образцов

Подозрение на острую вспышку ящура у свиней любого возраста и в поголовье, вакцинированном против ящура

• Соберите везикулярную жидкость у нескольких пораженных животных и проведите тестирование с помощью ИФА с антигенами или ПЦР; для ПЦР можно рассмотреть возможность объединения образцов.
• Соберите сыворотку у нескольких пораженных животных, у которых клинические симптомы наблюдались не менее 3 дней, и проведите индивидуальное тестирование с помощью ИФА с антителами; исследуйте неструктурный белок, отсутствующий в вакцине.

Подозрение на циркуляцию ящура у свиней любого возраста без клинических признаков заболевания, если поголовье не вакцинировано против ящура

• Соберите сыворотку у 30 случайно отобранных свиней и протестируйте ее индивидуально с помощью Ab-ELISA; целевой структурный белок

Подозрение на циркуляцию ящура у свиней любого возраста без клинических признаков, если поголовье вакцинировано против ящура

• Соберите сыворотку у 30 случайно отобранных свиней и протестируйте ее индивидуально с помощью Ab-ELISA; определите неструктурный белок, которого нет в вакцине