Практический опыт: Умение выявлять инфекцию РРСС у хряков по типу образца

Одним из возможных путей передачи вируса РРСС, который имеет наибольшее влияние, является введение доз спермы от инфицированных хряков. Одним из ключей к снижению риска, создаваемого этим путем передачи, является адекватная программа мониторинга в хрячнике. Как правило, метод ПЦР используется для определения наличия или отсутствия вируса в биологических образцах от хряков, и тип образца, выбранного для анализа, вероятно, является одним из критических моментов, которые определят успех программы, реализуемой в хрячнике.

В различных научных публикациях отмечаются следующие особенности динамики заражения и выделения вируса РРСС у хряков:

• Обнаружение в крови обычно происходит до обнаружения в сперме.
• Выделение семенным путем:
  • Нерегулярно: вирус не обнаруживается в сперме всех виремичных хряков.
  • Периодично: фаза выделения может длиться месяцами.

Из-за особенностей спермы, таких как наличие ингибиторов ПЦР, проведение ПЦР-анализа может быть затруднено.

Thus, it would seem that the ideal sample would be blood collection, but conventional blood collection via the femoral vein on a routine and frequent basis can cause welfare problems for boars due to the risk of phlebitis at the puncture site.

Таким образом, казалось бы, идеальным вариантом является забор крови, однако традиционный забор крови через бедренную вену на регулярной и частой основе может вызвать проблемы с благополучием хряков из-за риска возникновения флебита в месте прокола.

Чтобы уменьшить эту проблему, существуют возможные альтернативы этому типу выборки, такие как:

• Мазки из носа или рта
• Прокол иглой малого калибра и последующий сбор крови тампоном без среды

Для оценки эффективности возможных образцов и методов, которые будут внедрены в программу мониторинга хряков, позитивность и вирусная нагрузка определялись индивидуально с помощью метода ПЦР из следующих образцов в партии из 30 хряков с фермы, которая была инфицирована вирусом РРСС:

• Традиционный сбор крови с помощью вакуумной пробирки через пункцию бедренной вены (фото 1).
• Мазок крови, полученный путем микропункции в ушной вене и введение тампона в 0,5 мл стерильного физиологического раствора (фото 3).
• Карта FTA® с образцом крови, полученным путем микропункции в ушной вене (фото 4).
• Мазок изо рта или слюны.
• Неразбавленная сперма.

Результаты показали, что:

• 93% хряков дали положительный результат при обычном взятии крови из бедренной вены.
• 90% хряков дали положительный результат при взятии мазка крови микропункцией. Вирусные нагрузки были ниже, чем полученные при заборе крови из пробирки, а один хряк дал положительный результат при обычном взятии крови и отрицательный результат при взятии мазка крови.
• 25% образцов спермы дали положительный результат. Все хряки с положительным результатом на сперму были виремичными и также имели самую высокую вирусную нагрузку в крови. Вирусная нагрузка в сперме была ниже по сравнению с вирусной нагрузкой в ​​крови тех же хряков.
• 33% хряков дали положительный результат при взятии мазка из ротовой полости. Вирусная нагрузка положительных животных была ниже вирусной нагрузки в крови.
• 23% карт FTA® были положительными с низкой вирусной нагрузкой. Как и в случае с образцами спермы, животные с положительным результатом на картах FTA® имели самую высокую вирусную нагрузку в образцах крови, полученных обычным методом.

Выводы и перспективы на будущее

• Для раннего обнаружения присутствия вируса программа, основанная только на отборе проб спермы, может задержать обнаружение вируса.
• Низкая вирусная нагрузка в образцах спермы может привести к ложноотрицательным результатам ПЦР в зависимости от таких факторов, как разбавление собранной спермы, однородность собранного образца, обнаруживающая способность набора для ПЦР, используемый протокол ПЦР и т. д.
• Мазок крови, полученный путем микропункции, может быть хорошей альтернативой обычному отбору проб крови. Будущие исследования могут определить, как повысить обнаруживающую способность в зависимости от типа используемого тампона для достижения более высокой абсорбции крови и в зависимости от количества стерильного физиологического раствора, в который вводится тампон, для снижения разбавления.
• Карты FTA®, по-видимому, не являются хорошим типом образца на основании результатов этого исследования, хотя тот факт, что положительный результат обнаруживается при высокой вирусной нагрузке крови, поощряет будущие исследования, направленные на улучшение протокола отбора проб и извлечения фракции крови из карты.