Диагностика АЧС – это не только изучение результатов лабораторных исследований

Африканская чума свиней – тяжелое вирусное заболевание, поражающее свиней всех возрастов. В последние годы эта болезнь поразила свиноводческую отрасль во многих странах. В целом, АЧС распространяется достаточно медленно, поэтому существует возможность пресечь географическое распространение соответствующими действиями. Постановка диагноза на раннем этапе – ключевой элемент, который поможет избежать распространения. Изначальная диагностика африканской чумы свиней в полевых условиях может проводиться на основе клинических признаков и результатов вскрытия.

Клинические признаки:

На начальной стадии заболевания животные внезапно умирают, на ногах и ушах присутствуют признаки цианоза. Часто наблюдается лихорадка с температурой 40 - 42° C, рвота, кровавая или черная диарея (Фото 1, справа), депрессивное состояние, аборты (Фото 1, слева), кровяные назальные выделения (эпистаксис) и увеличение смертности.

Низковирулентные (вакцинные) штаммы вызывают хроническую атипичную форму заболевания в легкой форме с наличием небольшого количества смертей. Обычно у свиноматок наблюдаются хронические респираторные заболевания и хроническое бесплодие. Длительное время до явного течения заболевания, либо до видимых клинических признаков среди свиней с хроническим вакцинным вирусом зачастую объясняется на ферме как более длительный инкубационный период.

Поражения, наблюдаемые при вскрытии

• Покраснение надгортанника и трахеи, обычно присутствует интерстициальная пневмония с интерлобулярным отеком. Иногда наблюдается фибринозно-некротическая плевропневмония, которая отражает актинобациллярную плевропневмонию.
• Может присутствовать фибриновый миокардит и перикардит, а в грудном отделе и брюшной полости возможно наличие чрезмерного количества крови или сукровицы.
• Мезентериальные лимфатические узлы и особенно желудочно-печеночные узлы могут быть увеличеными, эдематозными и геморрагическими с некрозом при разрезе поверхности (Фото 2)
• Селезенка может быть увеличена, с множественными очагами омертвения или может быть практически нормальной.
• В печени могут присутствовать отчетливые кровоизлияния
• В почках возможны многочисленные очаги омертвления, а также петехиальные и экхимотические кровоизлияния (Фото 3). Возможен периренальный отек. Фундальный отдел желудка часто с покраснениями и с эрозиями, а спирально-ободочная кишка может быть наполнена кровяным содержимым.
• В мозгу может наблюдаться фибринозный менингит.

Степень тяжести поражения среди свиней различается и обычно предполагается большое число вскрываемых свиней.

Вскрытие должно проводиться с профессиональным обеспечением биобезопасности, однако, вскрытие не представляет единственную угрозу для инфицированной фермы, но дает ценную информацию, которую невозможно получить при использовании менее агрессивных диагностических методов.

Лабораторные методы

ПЦР: Диагноз АЧС обычно подтверждается положительным тестом на нуклеиновые кислоты и исключением других распространенных возбудителей с похожими поражениями. Наиболее распространенный тест – ПЦР на ген P72. Легкие (наиболее предпочтительный образец в нашей лаборатории), почки, селезенка, лимфатические узлы, сыворотка и кровь являются отличными образцами для ПЦР- теста. Ротовые мазки и ротовые жидкости чрезвычайно популярны, однако, количество вируса, обнаруженного в них, намного ниже, чем в крови и тканях, поэтому ложно-негативные результаты сильно распространены. Для анализа используют флуоресцентный качественный ПЦР и традиционный ПЦР. Традиционный ПЦР предлагает удобный способ секвенирования генов.

В тех случаях, когда вакцина с удаленным геном использовалась преднамеренно или штамм вируса с удаленным геном был введен случайно, тестирование нуклеиновой кислоты может не сработать у некоторых животных, так как количество выделяемого вируса намного ниже по сравнению с диким типом. Тем не менее, там, где доступны хорошие образцы тканей и крови, тестирование нуклеиновой кислоты на удаленный ген вакцинного вируса может выполняться. После положительного теста на ген P72, можно провести ПЦР тест на наличие ДНК от MGF 360 – 505 R и CD2v, чтобы определить является ли вирус полевым или вакцинным вирусом с удаленным геном.

Петлевая изотермическая амплификация (LAMP) предлагает быструю, дешевую, гибкую и чрезвычайно чувствительную альтернативу нуклеиновым кислотам, которая требует небольшого специализированного оборудования и, по-видимому, хорошо подходит для массовых испытаний, таких как мониторинг/скрининг при забое.

Серологию можно использовать для определения того, подвергались ли животные воздействию вируса АЧС, когда период времени от заражения до тестирования был достаточно длительным, чтобы прошел период виремии и присутствия вируса в тканях, или если хорошие образцы от вскрытия не были доступный.

Существует ряд наборов ИФА для поиска антител к Р 72, Р 30 и другим антигенам АЧС. Такие наборы часто используются для выявления и, как правило, отбраковки групп свиноматок, которые были вакцинированы преднамеренно или случайно подверглись воздействию нелегального вакцинного вируса.

Существует бланковый тест ELISA с захватом антигена, но ему сильно не хватает чувствительности, и его использование обычно ограничивается теми случаями, когда желателен быстрый ложноотрицательный результат.

При гистологическом исследовании выявляется генерализованный васкулит с инфарктом, кровоизлиянием и тромбозом во многих органах, особенно в легких, селезенке, лимфатических узлах, почках, головном мозге и кишечнике. Присутствует массивная лимфоидная деструкция в лимфатических узлах и селезенке, вакуолизация альвеолярных макрофагов. Часто встречаются некроз и изъязвление эпителия толстой кишки (Фото 4).

Использование гистопатологии для проверки типичных хронических поражений вакцинного вируса с удаленным геном может быть очень полезным. Свиньи, получившие подобные вакцины против АЧС, обычно имеют хронически активное заживление и фиброзирующие сосудистые поражения, включая тромбы и инфаркты в кишечнике, печени, лимфоидных тканях, сердце и почках. В лимфатических узлах могут быть участки кровоизлияний, некроза и лимфоидной деструкции, зоны фиброзирования и заживления. У вакцинированных племенных животных могут быть массивные зоны некроза и фиброза легких, которые часто ошибочно принимают за хроническую актинобациллярную плевропневмонию. Вакцинный вирус может не убить свинью, но свинья часто не может избавиться от вакцинного вируса.

Следует помнить, что ПЦР — отличный инструмент, но не безошибочный, и относительно реальной ситуации на ферме он не является точным на 100%. Это не означает, что ПЦР ненадежен. Наоборот... но тем не менее, результаты ПЦР - это результаты диагностических тестов, а не диагноз. Диагност — это исследователь, и он должен использовать все имеющиеся в его распоряжении инструменты. При подозрении на АЧС, как всегда, требуется осторожность в отношении биобезопасности, и даже более того. Однако существует несколько заболеваний, похожих на АЧС, и, вообще говоря, в дополнение к отрицательному тесту на АЧС требуется диагностика фактической причины проблемы, что может потребовать более тщательного наблюдения, чем удаление пахового лимфаузла или экстериоризация селезенки через разрез в виде замочной скважины.