Лабораторная диагностика классической чумы свиней
Alejandro Ramirez
04-Март-2022 (назад 4 года 2 месяцы)
04-Март-2022 (назад 4 года 2 месяцы)
Доступные исследования:
Цепная полимеразная реакция (ПЦР)
- Выявляет наличие определенной последовательности нуклеиновых кислот (ДНК)
- Типы образцов: сыворотка или ткани
- Преимущества:
- Наиболее чувствительный и предпочтительный метод выявления агента
- Зачастую можно объединять образцы в группы, это позволит снизить затраты при минимальной потере чувствительности
- Недостатки:
- Средний уровень затрат
- Требуются соответствующие праймеры
Проба с флюоресцирующими антителами (FAT)
- Выявляет наличие вируса
- Типы образцов: ткани, особенно миндалины
- Преимущества:
- Хороший уровень чувствительности
- Недостатки:
-
- Не может дифференцировать вакцинный тип от дикого
-
- Модифицированные живые вакцины могут давать положительный результат в течение примерно 2х недель
- Невозможен для большого количества образцов
- На результат влияет изолят вируса, используемый в исследовании
- Надежность в большой степени зависит от навыков специалиста
-
Моноклональные антитела для дифференциального теста на иммунопероксидазу (MAbs)
- Выявляет наличие агента
- Тип образца: FAT – положительные миндалины или другие органы
- Используют серии трех различных моноклональных антител (MAbs) для помощи при дифференциации инфекции вакцинного и дикого типа и других пестивирусов.
- Преимущества:
- Помогает дифференцировать инфекции вакцинного и дикого типа и других пестивирусов
- Недостатки:
- Средний и высокий уровень затрат
- Требуется FAT- положительный образец ткани
- Для анализа требуется воздействие тремя отдельными MAbs и одним поликлональным антителом (PAbs)
-
- MAbs, которые распознают все изоляты вируса КЧС
- MAbs, которые распознают все изоляты вируса КЧС, присутствующие в стране.
- MAbs, которые распознают вирусную диарею крупного рогатого скота и вирусы пограничной болезни овец
- PAbs, которые распознают КЧС.
- Невозможен для большого количества образцов
- Надежность в большой степени зависит от навыков специалиста
Твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA)
- Выявляет присутствие антител
- Типы образцов: сыворотка
- Преимущества:
- Животные остаются положительными в течение нескольких недель
- Могут использоваться в хронических случаях
- Может использоваться для дифференциации контакта с диким и с вакцинным типом с удаленным геном
- Любой положительный результат на дикий вирус рассматривается как значимый
- Недостатки:
- Если возможно, необходимо совместить надлежащий анализ с надлежащей делецией гена в вакцине (обычно Е2)
- Животные становятся серопозитивными обычно через по меньшей мере 21 день
- Может иметь перекрестную реакцию с другими пестивирусами
Нейтрализация вируса
- Выявляет наличие антител
- Тип образца: сыворотка
- Преимущества:
- Животные остаются положительными в течение нескольких недель
- Может использоваться в хронических случаях
- Чувствительность больше, чем у ELISA (может выявлять более низкие концентрации антител)
- Недостатки:
- Невозможен для большого количества образцов
- Животные становятся серопозитивными обычно через по меньшей мере 21 день
- Не может дифференцировать вакцинный тип от дикого
- Надежность в большой степени зависит от навыков специалиста
- Реактивность зависит от используемого изолята вируса
- Может иметь перекрестную реакцию с другими пестивирусами
Интерпретация результатов:
ПЦР
- Положительный: Присутствие дикого или вакцинного типа
- Отрицательный: отрицательный результат или уже слишком поздно для выявления инфекции
FAT
- Положительный: Присутствие дикого или вакцинного типа
- Отрицательный: отрицательный результат или уже слишком поздно для выявления инфекции
Моноклональные антитела для дифференциального теста на иммунопероксидазу (MAbs)
- Положительный: см. Таблицу 1.
- Отрицательный: отрицательный результат или уже слишком поздно для выявления инфекции
Таблица 1. Интерпретация результатов анализа MAbs. Источник: МЭБ
| ПКАТ | мкАТ специфичное для | Интерпретация | ||
|---|---|---|---|---|
| Штамм КЧС | Вакцинный штамм КЧС | Штамм вирусной диареи КРС/Пограничной болезни овец | ||
| + | + | - | - |
Полевой штамм КЧС |
| + | + | + | - | Вакцинный штамм КЧС |
| + | - | - | + | Штамм вирусной диареи КРС/Пограничной болезни овец |
| + | - | - | - | Прочие не-КЧС пестивирусы* |
* Всегда следует помнить о существовании новых штаммов КЧС и при любом подозрении на КЧС следует отправить анализы в Референтную лабораторию МЭБ.
ELISA
- Положительный: Материнские антитела или произошедший контакт (>21 дня) с диким вирусом или вакцинация.
- Отрицательный: Отрицательный или контакт с вакцинным вирусом или диким вирусом, но для выявления прошло еще слишком мало времени.
Таблица 2. Помогает продемонстрировать возможности DIVA (дифференциацию вакцининованных от инфицированных) некоторых анализов ELISA при использовании вакцин с удаленным геном.
| ELISA недифференциальный | ELISA-E2 результат | IИнтерпретация |
|---|---|---|
| Положительный | Положительный | Контакт с диким вирусом |
| Положительный | Отрицательный | Вакцинированное животное не контактировавшее с диким вирусом |
| Отрицательный | Положительный | Ошибка анализа, результат невозможен |
| Отрицательный | Отрицательный | Не вакцинированное животное, контакт с диким вирусом отсутствовал |
VN
- Положительный: Материнские антитела или произошедший контакт (>21 дня) с диким вирусом или вакцинация.
- Отрицательный: Отрицательный или контакт с вакцинным вирусом или диким вирусом, но для выявления прошло еще слишком мало времени.
Сценарии
Важно отметить, что некоторые страны могут потребовать подтверждения федеральных властей перед началом проведения любого тестирования на КЧС.
Подозрение на острую вспышку КЧС у свиней любого возраста и в поголовье, невакцинированном против КЧС.
- Проведите отбор крови у нескольких животных и протестируйте с помощью ПЦР; можно рассмотреть групповые анализы
- Проведите отбор селезенки и миндалин от умерших свиней и проведите ПЦР тест; можно рассмотреть групповые анализы
Подозрение на острую вспышку КЧС у свиней любого возраста и в поголовье, вакцинированном против КЧС.
- Проведите отбор крови от нескольких животных, которые не были вакцинированы от КЧС в течение последних 2х недель и протестируйте с помощью ПЦР; можно рассмотреть групповые анализы
- Проведите отбор селезенки и миндалин от умерших свиней и проведите ПЦР тест; можно рассмотреть групповые анализы
-
- Если ПЦР положительный проведите тестирование с помощью FAT и MAbs
Подозрение на циркуляцию хронической КЧС у свиней любого возраста с отсутствием смертности, поголовье не вакцинировано против КЧС.
- Отберите образцы крови от 30 свиней с клиническими признаками (таргетированный отбор) или случайным образом (отсутствие клинических признаков) и протестируйте с помощью ПЦР (если разрешено, можно сгруппировать образцы) и протестируйте индивидуально с помощью ELISA
Подозрение на циркуляцию хронической КЧС у свиней любого возраста с отсутствием смертности, поголовье вакцинировано против КЧС.
- Отберите образцы крови от 30 свиней(Не вакцинированных в течение последних 2х недель) с клиническими признаками (таргетированный отбор) или случайным образом (отсутствие клинических признаков) и протестируйте с помощью ПЦР (если разрешено, можно сгруппировать образцы) и протестируйте индивидуально с помощью недифференциального ELISA или Е2 дифференциального ELISA.