Лабораторная диагностика: Mycoplasma hyopneumoniae

Доступные исследования:

Макропатология

• Визуальный осмотр поражения легких

• Преимущества:
• • Легко выполнить
  • Можно оценить поздние заражения у свиней, отправляемых на бойню
• Недостатки:
  • Не диагностический/патогномоничный; множество других возможных причин
  • Требует дополнительного диагностического подтверждения

Бактериальная культура

• Выделение живого организма из тканей с поражениями или бронхиально-альвеолярного лаважа
• Типы образцов: Легкие или бронхиально-альвеолярный лаваж
• Преимущества::
  • Традиционный золотой стандарт
  • Свиньи могут тестироваться положительно в течение 7-8 месяцев (длительный период колонизации)
• Недостатки:
• • Требует специальной среды (питательная среда Фриза)
  • Доступен только в нескольких лабораториях
  • Дорогой
  • Очень сложно вырастить (много ложно-отрицательных результатов)

Иммунногистохомия (ИГХ)

• Выявляет наличие бактериального антигена
• Типы образцов: Ткани легких
• Преимущества::
  • Выявляет бактерии в месте поражения (хорошее доказательство причинно-следственной связи)
  • Свиньи могут тестироваться положительно в течение 7-8 месяцев (длительный период колонизации)
• Недостатки:
  • Необходимо предоставить правильный образец ткани – ткани легкого должны содержать поперечное сечение дыхательных путей (бронхиальные эпителиальные клетки)
  • Требуется значительно большее количество бактерий, чем для ПЦР
  • Оценивает небольшой образец тканей

Флуоресцентное антитело

• Выявляет наличие бактериального антигена
• Типы образцов: Ткани легкого
• Преимущества:
• • Выявляет бактерии в месте поражения (хорошее доказательство причинно-следственной связи)
  • Свиньи могут тестироваться положительно в течение 7-8 месяцев (длительный период колонизации)
• Недостатки:
  • Необходимо предоставить правильный образец ткани – ткани легкого должны содержать поперечное сечение дыхательных путей (бронхиальные эпителиальные клетки). См. Фото 2 выше.
  • Требуется значительно большее количество бактерий, чем для ПЦР
  • Оценивает небольшой образец тканей.

Цепная полимеразная реакция (ПЦР)

• Выявляет наличие определенной последовательности нуклеиновых кислот (ДНК).
• Типы образцов: Легкие, смывы (назальные, гортанные, трахейно-бронхиальные или бронхиальные) или бронхиально-альвеолярный лаваж
• Преимущества:
  • Очень высокая чувствительность (может выявлять небольшое количество бактерий)
  • Для усиления диагностической чувствительности при диагностике поголовья, можно группировать образцы
  • Свиньи могут тестироваться положительно в течение 7-8 месяцев (длительный период колонизации)
  • Средняя стоимость
• Недостатки:
  • Не доказывает наличие болезни
  • Ротовые жидкости плохой тип образца (много ложно-отрицательных результатов)

Таблица 1: Схематичное резюме исследовательских и полевых результатов по чувствительности различных типов образцов при ПЦР-тестировании на Mycoplasma hyopneumoniae

	Относительная чувствительность	Группировка*
Ротовые жидкости	-	Нет
Назальные смывы	+	Регулируемая
Гортанные смывы	++	Целесообразна
Трахейно-бронхиальные смывы	++	Целесообразна
Бронхиальные смывы	+++	Целесообразна
Бронхиально-альвеолярный лаваж	++	Нет
Ткани легкого	++++	Да

* Для увеличения диагностической чувствительности при проведении диагностики поголовья, не отдельных свиней, группирование образцов может быть целесообразным

Твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA)

• Выявляет наличие антител
• Тип образца: сыворотка
• Преимущества:
  • Животные могут оставаться положительными в течение длительного периода
  • Можно использовать в хронических случаях
• Недостатки:
  • Выявление определенных антител и время выявления может сильно варьироваться при использовании различных доступных коммерческих наборов
  • Не различает разницы между материнскими антителами и контактными
  • Уровень антител не коррелирует с уровнем защиты
  • Вакцинация не вызывает сероконверсию (сильно зависит от вакцины и используемого анализа)
  • У многих инфицированных свиней не происходит сероконверсия
  • Антитела не всегда зависят от длительности инфекции
  • Некоторая перекрестная активность с другими Mycoplasmas, особенно M. flocculare, которая непатогенна и распространена среди свиней.

Интерпретация результатов:

Макропатология:

• Положительный: Макропатология легкого может быть использована для возможной диагностики
• Отрицательный: На ранних стадиях обычно не проявляются большие поражения легких

Бактериальная культура:

• Положительный: Подтверждение болезни
• Отрицательный, бактерии могли быть пропущены, если тестирование проводится через слишком большое время после заражения или после лечения антибиотиками или из-за отсутствия роста на фоне избыточного роста других бактерий (присутствуют, но слишком сложно выращивать)

Иммунногистохомия (ИГХ)

• Положительный: Бактерии присутствуют в месте поражения
• Отрицательный: отрицательный результат или уже слишком поздно для выявления инфекции или после лечения антибиотиками

Флуоресцентное антитело

• Положительный: Бактерии присутствуют на месте поражения
• Отрицательный: Отрицательный: отрицательный результат или уже слишком поздно для выявления инфекции или после лечения антибиотиками

ПЦР

• Положительный: Бактерии присутствуют, не подтверждает болезнь
• Отрицательный: Отрицательный: отрицательный результат или уже слишком поздно для выявления инфекции или после лечения антибиотиками

ELISA

• Положительный: Материнские антитела или после контакта (обычно 3-8 недель после контакта) к вакцинным или диким бактериям
• Отрицательный или инфекция не стимулирующая сероконверсию или слишком рано для выявления (обычно требуется 3-8 недель после контакта)

Сценарии

Свиньи на откорме с хроническим кашлем:

• Вскрытие 1-3 недавно умерших свиней или выбраковка кашляющих свиней. Макропаологическая оценка легких для кранио-вентральной консолидации. Отберите большое количество кусочков легкого (убедитесь, что в образец входит дыхательные пути) и поместите в формалин для оценки с помощью иммунногистохомия и флуоресцентного антитела
• Процент легких с поражениями напрямую связан с экономическим влиянием заболевания.

Подтверждение отрицательного результата по Mycoplasma hyopneumoniae для ремонтных свинок

• Убедитесь, что клинические признаки кашля отсутствуют
• Соберите по меньшей мере 30 случайных образцов сыворотки от ремонтных животных и протестируйте с помощью ELISA

Мониторинг ремонтных животных на предмет выделения до ввода в положительное или отрицательное поголовье

• Убедитесь, что клинические признаки кашля отсутствуют
• Соберите по меньшей мере 30 случайных образцов сыворотки от ремонтных животных. Сгруппируйте по 5-6 образцов и протестируйте с помощью ПЦР.