Лабораторная диагностика болезни Ауески (Псевдобешенство)

Доступные анализы:

Иммунногистохимия (ИГХ)

• Выявляет наличие вирусного антигена
• Тип анализа: ткани
• Преимущества:
  • Выявляет вирус в месте поражения (хорошее доказательство причинно-следственной связи)
  • Любой положительный результат считается значимый.
• Недостатки:
  • Необходимо предоставлять правильные образцы тканей.
  • Необходимо большее количество вируса, чем для ПЦР.
  • Оценивает только небольшие образцы тканей.
  • Скрытые инфекции, скорее всего, будут пропущены, если они не затрагивают тройничный нерв и/или миндалины.

Цепная полимеразная реакция (ПЦР)

• Выявляет наличие определенной последовательности нуклеиновых кислот (ДНК).
• Типы образцов: ткани
• Преимущества:
  • Высокая чувствительность
  • Количественная оценка ПЦР связана с наличием поражения.
  • Средние затраты
  • • Зачастую возможно группирование образцов ткани для снижения затрат при этом потеря чувствительности – минимальная (особенно, что касается клинической зависимости)
  • Некоторые ПЦР исследования могут выявлять различия между «диким» вирусом и вакцинным вирусом с удаленным геном.
• Недостатки:
  • Для наилучших результатов необходимы образцы тканей (поле смерти)
  • Скрытые инфекции, скорее всего, будут пропущены, если они не затрагивают тройничный нерв и/или миндалины.

Твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA)

• Выявляет наличие антител
• Типы образцов: сыворотка
• Преимущества:
  • Животные остаются положительными в течение нескольких недель
  • Может использоваться в хронических случаях
  • Может использоваться для дифференциации контакта с «диким» вирусом и вакцинным вирусом с удаленным геном (см. Таблицу 1).
  • Любой положительный результат считается значимый.
  • После контакта с «диким» вирусом требуется всего 5-7 дней, чтобы стать серопозитивным.

Таблица 1 помогает продемонстрировать Разницу между вакцинированными и инфицированными некоторых анализов ELISA при использовании вакцины с удаленным геном.

Реакция нейтрализации вируса	Дифференцированный ELISA направленный на удаленный ген gE/g1 или gB	Интерпретация
Положительная	Положительная	Контакт с диким вирусом
Положительная	Отрицательная	Вакцинированное животное, не контактировавшее с диким вирусом
Отрицательная	Положительная	Ошибка анализа, результат невозможен
Отрицательная	Отрицательная	Невакцинированное и неконтактировавшее с диким вирусом

• Недостатки:
  • Необходимо сопоставить анализ с надлежащим удаленным геном в вакцине.
  • Становится серопозитивным через 10-14 дней после вакцинации.

Нейтрализация вируса

• Выявляет наличие антител
• Тип образца: сыворотка
• Преимущества:
  • Животные остаются серопозитивными в течение нескольких недель
  • Можно использовать в хронических случаях
  • Более высокая чувствительность, чем у ELISA (может выявлять более низкую концентрацию антител).
• Недостатки:
  • Нецелесообразно для большого количества образцов
  • Требуется 12 дней, чтобы животные стали серопозитивными.
  • Не может дифференцировать между вакциной и «диким» вирусом.
  • Надежность в большей степени зависит от технических навыков.
  • Скорость реакции зависит от используемого изолята вируса.

Интерпретация результатов:

ИГХ

• Положительный: Вирус присутствует в месте поражения
• Отрицательный: отрицательный результат или уже слишком поздно для выявления вируса

ПЦР

• Положительный: Вирус присутствует. Недавняя вакцинация модифицированным живым вирусом может привести к положительным ПЦР результатам.
• Отрицательный: Отрицательный результат или вирус могли пропустить если тестирование проводилось через длительное время после заражения.

ELISA (таргетированный удаленный ген)

• Положительный: материнские антитела или прошлый контакт (>5-7 дней) с «диким» вирусом.
• Отрицательный: Отрицательный результат или прошло слишком мало времени после заражения «диким» вирусом.

Нейтрализация вируса

• Положительный: Прошлый контакт (> 5-14 дней) с «диким» вирусом или вакциной.
• Отрицательный::
  • Отрицательная реакция на вакцину или «дикий» вирус.
  • Прошло слишком мало времени для выявления инфекции (<5-7 дней для «дикого» вируса или <10-14 дней для вакцинации).

Сценарии

Свиноматки с абортами

• Соберите 6-8 плодов и объедините образцы для ПЦР теста.
• Свиноматки/свинки, у которых случился аборт: Соберите образцы от свиноматок/свинок, у которых недавно произошел аборт для ПЦР-теста. Можно объединить в группы по 5.
  • Индивидуальное тестирование образцов с помощью ELISA может проводиться если прошло >7 дней после аборта.
  • Нейтрализация вируса вместо ELISA предпочтительно для поголовья, не вакцинированного от болезни Ауески в силу более высокой диагностической чувствительности исследования.

Отбор ремонтного молодняка из вакцинированного поголовья с известными положительными животными.

• Отберите образцы крови от 100% ремонтных свинок и индивидуально протестируйте образцы с помощью ELISA или Нейтрализации вируса
  • Оставьте только животных положительных по нейтрализации вируса или негативных по ELISA (см. Таблицу 1 выше).

Отбор ремонтного молодняка от вакцинированного поголовья с неизвестными положительными животными

• Отберите образцы крови от, по крайней мере, 30 случайно выбранных ремонтных свинок и индивидуально протестируйте с помощью ELISA или Нейтрализации вируса
• • Если все протестированные образцы положительны по реакции нейтрализации вируса и негативны по ELISA (см. Таблицу 1 выше) вы можете оставить все группу ремонтных животных.
  • Если какой-либо образец негативный по реакции нейтрализации вируса, необходимо протестировать 100% оставшихся свинок и оставить только тех, которые были вакцинированы (Реакция на нейтрализацию вируса = положительная).
  • Если какая-либо свинка оказывается положительной по ELISA, сделайте повторную оценку целесообразности сохранения животных из этой группы, так как это говорит о том, что поголовье положительно по болезни Ауески.