Лабораторная диагностика: Илеит (Lawsonia intracellularis)

Доступные анализы:

Макропатология

• Оценка наличия поражения тканей, которые могут указывать на наличие заболевания.
• Месторасположения поражения: терминальный отдел подвздошной кишки (иногда может быть и в слепой кишке)
• Существует 3 ярко выраженные формы заболевания:
  • Пролиферативная геморрагическая энтеропатия (острая/молниеносная)
    • Утолщение слизистой оболочки кишечника
    • Геморрагическое содержимое со сгустками

• Аденоматоз кишечника свиней (хронический неосложненный)
  • Сильное утолщение кишечника
  • Обычно без крови

• Некротический энтерит (хронический осложненный)
  • Сильное утолщение кишечника
  • Фибринозно-некротическая мембрана над утолщенным кишечником
  • Обычно без крови

• Преимущества
  • Предварительный диагноз может быть поставлен после макроскопического исследования кишечника
  • Можно выделить 3 ярко выраженные формы заболевания
• Недостатки:
  • Поражения не являются исключительными/диагностическими для илеита; другие заболевания могут вызывать похожие поражения
  • Оценка утолщения может быть субъективной, особенно, когда сокращение кишечника может создать временное впечатление, что стенки кишечника толще, чем обычно

Гистопатология

• Оценивает наличие поращения тканей (утолщение), которое может подтвердить наличие заболевания.
• Тип образка: ткань
• Преимущества:
  • Гистопатологические поражения почти всегда являются диагностическими
    • Может быть подтверждено наличие пролиферации незрелых эпителиальных клеток крипт.
    • Наблюдается минимальная инфильтрация воспалительных клеток или ее отсутствие.
  • Может выявить среднее течение заболевания
• Недостатки:
  • Необходимы сохраненные в формалине ткани кишечника о недавно умершего животного
  • Иногда заболевание может быть сегментным, особенно на ранней стадии

Иммунногистохимия (ИГХ)

• Обнаруживает наличие бактериального антигена
• Тип образца: ткань
• Преимуществаs:
  • ​​​​​​​Золотой стандарт
  • Обнаруживает заболевание в месте поражения (хорошее доказательство причинно-следственной связи)
  • ​​​​​​​Может выявить низкое, среднее и высокое количество присутствующих бактерий
• Недостатки:
  • ​​​​​​​Необходимо значительно большее количество присутствующих бактерий, чем это требуется для ПЦР

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

• Выявляет наличие определенных последовательностей бактериальной нуклеиновой кислоты (ДНК)
• Типы образцов: ткани кишечника, мазки с фекалиями, фекалии
• Преимущества:
  • Высокая чувствительность
  • Количественная оценка ПЦР связана с наличием поражения
  • Средняя стоимость
    • Зачастую можно объединить образцы кала и тканей для снижения затрат при минимуме потери чувствительности (особенно с точки зрения клинической значимости)
• Недостатки:
  • ​​​​​​​Высокая чувствительность – подтверждает наличие бактерий, но не болезни
  • ​​​​​​​Не различает бактерии от живой вакцины и инфекции

Иммуноферментный анализ (ELISA)

• Выявляет наличие антител
• Типы образцов: сыворотка
• Преимущества:
  • Животные остаются положительными в течение нескольких недель
  • Можно использовать при хронических случаях
  • Диагностическая чувствительность выше, чем при иммунофлуоресцентном анализе (МФА)
• ​​​​​Недостатки:
  • Выявляются специфические антитела, время обнаружения может немного варьироваться в зависимости от доступных коммерческих наборов
  • ​​​​​​​Для того, чтобы животные стали серопозитивными, требуется от 2 до 4 недель в зависимости от бактериальной нагрузки.
  • ​​​​​​​Не различает бактерии от живой вакцины и инфекции

Иммунофлуоресцентный анализ (МФА)

• Выявляет наличие антител
• Типы образцов: сыворотка
• Преимущества:
  • Животные остаются положительными в течение нескольких недель)
  • ​​​​​​​Может использоваться в хронических случаях
• Недостатки:
  • ​​​​​​​Диагностическая чувствительность ниже, чем у иммуноферментного анализа
  • Не подходит для большого количества образцов
  • Для того, чтобы животные стали серопозитивными, требуется от 2 до 4 недель в зависимости от бактериальной нагрузки.
  • Не различает бактерии от живой вакцины и инфекции
  • ​​​​​​Точность в большей степени зависит от навыков технического специалиста

Интерпретация результатов:

Макропатология

• Положительная: Зачастую достаточно предположительного диагноза
• Отрицательная: Отсутствуют макроположительные поражения кишечника

Гистопатология

• Положительная: Выраженная связь между уплотнением и заболеванием
• Отрицательная: Поражения кишечника отсутствуют

ИГХ

• Положительная: Бактерии присутствуют в месте поражения
• Отрицательная: Отрицательный результат или ранняя стадия заражения (медленный рост бактерий) или очень поздняя стадия заражения

ПЦР

• Положительный
  • Ct <20 выраженная связь с поражениями кишечника (ИГХ) и болезнью
  • Ct>30 говорит о наличии организма, но не связанного с поражением кишечника (ИГХ отрицательная), поэтому маловероятно эконмическое влияние в указанное время.
• Отрицательный: Отрицательный результат или могли быть пропущены бактерии при тестировании на ранней стадии (медленный рост бактерий) или на поздней стадии заражения.

Иммуноферментный анализ (ELISA)

• Положительный: Контакт в прошлом (> 2-4 недель) до вакцинирования или инфекции
• Отрицательный:
  • Отрицательный результат к вакцине или инфекции
  • Слишком ранняя стадия заражения для обнаружения (медленный рост бактерий)
  • Использование антибиотиков может подавить рост бактерий и снизить иммунный ответ

Иммунофлуоресцентный анализ (МФА)

• Положительный: Контакт в прошлом (> 2-4 недель) до вакцинирования или инфекции
• Негативный:
  • Отрицательный результат к вакцине или инфекции
  • Слишком ранняя стадия заражения для обнаружения (медленный рост бактерий)
  • Использование антибиотиков может подавить рост бактерий и снизить иммунный ответ

Сценарии

Свиньи с поносом на доращивании (острая иди хроническая форма):

• Соберите образцы фекалий от 10 или более животных с поносом, не подвергающихся лечению и проведите ПЦР тест по группам из 5 образцов.
• Проведите вскрытие 1-3 недавно умерших свиней или умертвите свиней с поносом. Оцените терминальную часть подвздошной кишки на предмет утолщения, отберите образец подвздошной кишки и поместите в раствор формалина для гистопатологии и ИГХ.

Свиньи на откорме (хроническая форма):

• Проведите вскрытие 1-3 недавно умерших свиней или умертвите свиней с поносом. Оцените терминальную часть подвздошной кишки на предмет утолщения, отберите образец подвздошной кишки и поместите в раствор формалина для гистопатологии и ИГХ.

Определение времени контакта:

• Соберите образцы от 10-15 свиней в возрасте 8, 11, 14 и 17 недель
  • Два подхода к сбору:
    • Кросс-секциональный – одновременно отберите образцы от групп животных разного возраста (быстрее получите результат)
    • ​​​​​​​Продолжительный – отбирайте образцы от одних и тех же свиней на протяжении периода времени (результаты более точные)
  • ​​​​​​​Тестирование образцов сыворотки посредствам иммуноферментного анализа (предпочтительно) или иммунофлуоресцентного анализа
  • ПЦР-тест образцов фекалий, сгруппированных по 5 образцов.