Использование языка для мониторинга вируса РРСС

Мониторинг наличия вируса РРСС у свиноматок используется для классификации статуса фермы. Классическая и наиболее широко используемая классификация основана на разработанной Holtkamp и др. (2011) системе отбора образцов крови, проводимых раз в месяц в течение нескольких месяцев подряд. В соответствие с данным протоколом, фермы разделяются на:

• Отрицательные, когда у племенных свиноматок результаты ИФА отрицательные
• Положительно стабильные, когда ПЦР показывает отсутствие виремических свиней при отъеме по крайней мере в течение 90 дней.
• Положительно нестабильные, когда вирус был обнаружен в каких-либо тканях до достижения минимума в 90 дней, когда ПЦР-отрицательные результаты считаются положительно стабильными.

В тоже время мониторинг можно проводить для оценки эффективности внедренных после вспышки РРСС мер по борьбе с болезнью. В данном случае, изначальная цель – достичь стабильности на опоросе, что значит отсутствие вируса во всех тканях новорожденных поросят. Вторая цель – достичь стабильности при отъеме и, наконец, если на ферме есть стадия доращивания, то достичь отсутствия вируса при отборе образцов в конце доращивания.

Новые типы образцов для мониторинга РРСС

После нескольких лет использования крови как единственного типа образца для мониторинга РРСС, были разработаны новые системы отбора образцов для крупных ферм, например, ротовые жидкости, собранные на веревках, которые широко применяются на доращивании и откорме. Совсем недавно хорошие результаты показали исследования новых методик обнаружения вируса РРСС из образцов жидкостей, отобранных при кастрации и ампутации хвостов, Vilalta и др. (2018). Опубликованные результаты от образцов жидкостей яичек лучше, чем от хвостов. Использование подобных жидкостей позволяет отбирать образцы от большего количества животных и делать это чаще, что очень полезно для определения вируса РРСС, когда процент животных-переносчиков при рождении низок. Если процент кастрации поросят маленький, практическое применение данного метода невозможно. Кроме того, европейские правила гуманного отношения к животным касательно регулярной ампутации хвостов, также ограничивают использования данных жидкостей в качестве образцов.

Основываясь на этих руководствах, целях и условиях, команда из Grup de Sanejament Porcí in Lleida, Испания разработала проект по оценке новой техники мониторинга, основанной на сборе образцов от частей умерших животных. Образцы хранятся замороженными и отправляются в лабораторию с определённой периодичностью. Сбор и анализ этого типа совокупного и постоянного набора образцов позволяет нам определить момент, когда вирус перестает обнаруживаться в тканях мертвых животных.

Вслед за первыми результатами, было предложено, что сбор кусочков языка от мертворожденных поросят является хорошей системой для определения присутствия вируса у поросят при рождении.

Ткани языка мертвых свиней как диагностический образец

Система основана на сборе по крайней мере двухсантиметровых кусочков языка, хранении их пакетах или контейнерах в морозильнике и отправке с желаемой периодичностью (ежемесячно или от каждой партии опоросов). Данная система показала хорошие результаты и множество преимуществ. Язык был выбран потому что, как правило, этот образец чище, чем хвост и предоставляет необходимое количество жидкости, и в случае мертворожденных поросят, в нем присутствует другие элементы, такие как слюна и околоплодная жидкость (Фото 1). Кроме того, для работников фермы не требуется каких-либо определенных навыков для самостоятельного отбора образцов.

В период лактации, доращивания или откорма используется такая же система; часть языков отбирается у животных, умерших на этих этапах в исследуемый период. В данных случаях образцы хранятся отдельно в трех контейнерах, в соответствие с этапом производства, в котором животное умерло: начало, середина или конец перевода или откорм.

Совокупный образец хранится замороженным в пакетах или контейнерах до отправки в диагностическую лабораторию. Там он обрабатывается для извлечения жидкости.

Затем проводится ПЦР –анализ жидкости для определения присутствия или отсутствия вируса. Используя метод секвенирования по Сенгеру также возможно секвенировать несколько участков генома вируса.

Основные требования для этой системы: доступный морозильник на ферме и необходимое количество животных для отбора образцов в период исследования.

Основные преимущества данной системы отбора образцов

• Обычно позволяет отбирать образцы чаще и от большего количества животных. Можно организовать регулярный сбор языков ото всех мертворожденных поросят и мертвых животных во время лактации.
• Отбор образцов не требует сложных технических навыков. Работники фермы могут самостоятельно проводить отбор образцов.
• Исключает стресс, связанный с отбором образцов у живых животных.
• Чувствительность и специфичность техники в определенных случаях улучшается целевым отбором образцов и большим количеством животных, от которых образцы отбираются.
• Качество секвенирования по Сенгеру обычно лучше, чем при анализе ротовых жидкостей.
• Наконец, стоимость мониторинга заболевания ниже, по сравнению с традиционным ежемесячным отбором крови.

Мониторинг РРСС с использованием образцов от мертвых свиней позволяет нам получить важную эпидемиологическую информацию в производственных циклах, где можно приложить меньше усилий для мониторинга наличия вируса, например, при рождении, на доращивании и на откорме.