Administração transabdominal de AAV9-GFP por ultrassons em porcos: modelo translacional e minimamente invasivo para terapia génica fetal in utero

A terapia génica fetal in utero (TGF-I) tem o potencial de corrigir distúrbios monogénicos graves antes que ocorram danos irreversíveis. Apesar dos resultados promissores em modelos animais de pequeno e grande porte, a sua aplicação na prática clínica continua a ser limitada por dificuldades técnicas, preocupações de segurança e falta de protocolos padronizados em espécies modelo relevantes para a doença.

Métodos: Foi estabelecida uma abordagem minimamente invasiva, guiada por ecografia, para a administração sistémica de genes em fetos suínos e validada utilizando um vetor AAV9 autocomplementar que codifica GFP sob um promotor CAG. As injeções foram realizadas nas diferentes idades gestacionais (IG 80 e IG 108) por via intracardíaca ou venosa umbilical. Os desfechos pós-natais foram monitorizados, e a biodistribuição e expressão do transgene foram avaliadas por qPCR, ddPCR, imunofluorescência e Western blot. A resposta inflamatória, a toxicidade e a segurança materna foram analisadas através do perfil de citocinas e do exame histológico.

Resultados: O procedimento foi bem tolerado, sem morbilidade materna significativa ou desfechos obstétricos adversos, exceto um parto prematuro. A análise de biodistribuição revelou uma ampla presença do vetor nos tecidos periféricos, com forte expressão de GFP no fígado e no coração. Notavelmente, não foram observadas toxicidade tecidular, necrose ou fibrose significativas em nenhum dos órgãos analisados. Foram detetados ligeiros aumentos de citocinas pró-inflamatórias (GM-CSF, GRO-α, IFN-γ), embora estes não estivessem associados a alterações histopatológicas. Não foram detetados anticorpos anti-capsídeo do AAV9 no soro de leitões e porcas, sugerindo uma resposta imunitária mínima ao vector.

Conclusão: Estes resultados demonstram a segurança, viabilidade e eficácia do teste genético fetal intrauterino ecoguiado em suínos, corroborando o seu potencial como plataforma translacional para a terapia genética em fetos afetados por doenças congénitas graves. Este modelo oferece uma estrutura valiosa para o desenvolvimento pré-clínico de intervenções pré-natais, particularmente para perturbações de início precoce, como as doenças mitocondriais.