Diagnóstico laboratorial: Febre Aftosa

Ensaios disponíveis:

Patologia macroscópica

• Identificação de lesões, especialmente vesículas no focinho e nas áreas das patas.
• Prós:
  • Fácil identificação macroscópica de vesículas.
• Contras:
  • Clinicamente indistinguível de outras doenças vesiculares.
  • Frequentemente requer confirmação diagnóstica adicional.

Reacção em cadeia da polimerase (PCR)

• Detecta a presença de uma sequência específica de ácido nucleico viral (ARN).
• Tipos de amostras: líquido vesicular ou epitélio (tipo de amostra preferencial), soro, amostra esófago-laríngea (quando não se dispõe de vesícula ou epitélio), leite.
• Prós:
  • Método mais sensível e preferido para detetar o agente.
  • As amostras podem frequentemente ser agrupadas para reduzir os custos e minimizar a perda de sensibilidade.
  • Pode ter como alvo proteínas universais para deteção geral ou proteínas específicas do serótipo para serotipagem.

• Contras:
  • Custo moderado.
  • Necessita primers adequados, especialmente quando dirigido a proteínas estruturais que são específicas do serótipo.

Lista de serótipos conhecidos actualmente para a Febre Aftosa (Não existe protecção cruzada entre serótipos):

• Ásia 1
• África do Sul Tipo 1 (SAT 3)
• África do Sul Tipo 1 (SAT 2)
• África do Sul Tipo 1 (SAT 1)
• C
• A
• O

Ensaio por imunoabsorção ligado a enzimas de detecção de antigénios (Ag-ELISA)

• Detecta a presença de antigénio.
• Tipos de amostras: líquido vesicular ou epitélio (tipo de amostra preferencial), soro, amostra esófago-laríngea (quando a vesícula ou o epitélio não estão disponíveis), leite.
• Prós:
  • Método de eleição para a detecção e identificação de serótipos.
  • Pode ser utilizado para o diagnóstico de um único animal ou de uma exploração agrícola.
  • Pode ser utilizado para diferenciar serótipos.
  • Qualquer resultado positivo para o vírus selvagem é considerado significativo.

Tabela 1. Podem ser utilizadas diferentes proteínas virais para ajudar nos objectivos de diagnóstico

Antigénio diana	Variabilidade	Uso
Proteínas estruturais	Variável	Serotipagem
Proteínas não estruturais	Conservada	Detecção universal: Não específica da serotipagem

• Contras:
  • A presença de antigénio viral pode ser específica do serótipo.
  • Podem ser necessários vários testes para identificar os serótipos.

Ensaio por imunoabsorção ligado a enzimas de detecção de anticorpos (Ab-ELISA)

• Detecta a presença de anticorpos.
• Tipos de amostra: soro.
• Prós:
  • Os anticorpos circulantes podem ser detectados 3-5 dias após o início dos sinais clínicos.
  • Os animais permanecem positivos durante vários meses.
  • Pode ser utilizado em casos mais antigos.
  • Pode ser utilizado para diferenciar a exposição ao vírus selvagem de algumas vacinas mortas/recombinantes (que visam proteínas não estruturais específicas).
  • Qualquer resultado positivo para o vírus selvagem é considerado significativo.
  Contras:
  • A resposta de anticorpos é específica do serótipo.
  • Alguns animais podem permanecer seropositivos durante vários anos.
  • A intensidade da resposta imunitária pode variar consoante a virulência da estirpe.
  • A presença de anticorpos nem sempre se correlaciona com a protecção.

Dispositivos de fluxo lateral

• Detecta a presença do antigénio.
• Tipos de amostras: líquido vesicular ou epitélio.
• Prós:
  • Método de eleição para a detecção e identificação de serótipos.
  • Pode ser utilizado para o diagnóstico de um único animal ou de uma exploração agrícola.
  • Pode ser utilizado para diferenciar serótipos.
  • Qualquer resultado positivo para o vírus selvagem é considerado significativo.
  Contras:
  • A presença de antigénio viral pode ser específica do serótipo.
  • Menos sensível do que o Ag-ELISA
  • Podem ser necessários vários testes para identificar os serótipos.

Isolamento do vírus

• Isola o vírus vivo.
• Tipos de amostras: líquido vesicular ou epitélio (tipo de amostra preferido), soero, amostra esofágico-laríngea (quando não se dispõe de vesícula ou epitélio), leite.
• Prós:
  • Critério de referência.
  • Isolamento do vírus para ser utilizado no desenvolvimento de vacinas (vacinas autogénicas) ou testes serológicos (ELISA) para determinar o serótipo.
• Contras:
  • Caro.
  • Resultados lentos.
  • Requer linhas celulares especiais, células tiróideas de bovino (vitelo) ou células renais de porco, vitelo ou cabrito.
  • O processo de inoculação é muito trabalhoso.
  • Com frequência difícil de cultivar (muitos falsos negativos).

Sequenciação genética

• Sequência segmentos genéticos do ácido nucleico (ARN) do vírus.
• Tipos de amostras: líquido vesicular ou epitélio (tipo de amostra preferido), soro, amostra esofágico-laríngea (quando não há vesícula ou epitélio), leite.
• Prós:
  • Pode ajudar com a epidemiologia molecular.
  • Ajuda a identificar o serótipo.
• Contras:
  • Caro.
  • Resultados lentos.

Interpretação de resultados:

Lesões macroscópicas (vesículas)

• Positivo: Deve ser investigada como possível Febre Aftosa.
• Negativo: Negativo ou não detectada se o teste for realizado muito depois de a infecção ou se a infecção é por uma estirpe leve.

PCR

• Positivo: O vírus está presente.
• Negativo: Negativo ou o vírus não é detectado se o teste for realizado muito depois da infecção.

Ag-ELISA

• Positivo: O vírus está presente.
• Negativo: Negativo, o vírus não se detecta se o teste for realizado muito depois da infecção ou se foi analisado um serótipo incorrecto.

Ab-ELISA

• Positivo: Anticorpos maternais ou exposição anterior (>2-3 dias) a vírus de campo ou algumas vacinas.
• Negativo: Negativo ou exposição à vacina ou ao vírus selvagem demasiado recente para ser detectado ou testado para anticorpos de serótipo incorrecto.

Dispositivos de fluxo lateral

• Positivo: O vírus está presente.
• Negativo: Negativo, o vírus não é detectado se o teste for realizado muito tempo após a infecção ou se tiver sido testado o serótipo errado.

Isolamento do vírus

• Positivo: O vírus está presente.
• Negativo: Negativo, o vírus não é detectado se o teste for realizado muito tempo após a infecção ou se tiver sido utilizada a linha celular errada.

Sequenciação genética

• Positivo: O vírus está presente.
• Negativo: Negativo, o vírus não é detectado se o teste for realizado muito tempo após a infecção ou se estiver presente uma quantidade de vírus demasiado pequena para a sequenciação.

Cenários

É importante notar que, em alguns países, pode ser necessária a aprovação das autoridades competentes antes de se poder efectuar qualquer teste à Febre Aftosa.

Suspeita de surto agudo de Febre Aftosa em suínos de qualquer idade e a exploração não está vacinada contra a Febre Aftosa

• Recolher líquido vesicular de vários animais afectados e analisar por Ag-ELISA ou PCR; pode considerar-se a possibilidade de agrupar as amostras para a PCR.

Suspeita de surto agudo de Febre Aftosa em suínos de qualquer idade e a exploração está vacinada contra a Febre Aftosa

• Colher líquido vesicular de vários animais afectados e testar por Ag-ELISA ou PCR; pode considerar-se a possibilidade de agrupar as amostras para a PCR.
• Recolher soro de vários animais afectados que tenham apresentado sinais clínicos durante, pelo menos, 3 dias e testar individualmente por Ab-ELISA; a proteína não estrutural alvo não está presente na vacina.

Suspeita de circulação de Febre Aftosa em suínos de qualquer idade sem sinais clínicos e a exploração não está vacinada contra a Febre Aftosa

• Recolher soro de 30 suínos amostrados aleatoriamente e analisar individualmente por Ab-ELISA; proteína estrutural alvo.

Suspeita de circulação de Febre Aftosa em suínos de qualquer idade sem sinais clínicos e a exploração está vacinada contra a Febre Aftosa

• Recolher soro de 30 suínos amostrados aleatoriamente e analisar individualmente por Ab-ELISA; a proteína não estrutural alvo não está presente na vacina.