Diagnóstico laboratorial: Actinobacillus pleuropneumoniae (APP)

Testes disponíveis

Patologia macroscópica

• Avalia a presença de lesões nos tecidos que podem ser quase diagnósticas da doença.
• Localização das lesões: pulmão.
• Áreas de consolidação necro-hemorrágica no pulmão acompanhadas de pleurite fibrinosa (figura 1).

• Prós:
  • Pode ser feito um diagnóstico presuntivo após um exame macroscópico dos pulmões.
  Contras:
  • O Actinobacillus suis pode causar algumas lesões semelhantes, mas menos graves.
  • Não identifica o serótipo.

Cultura bacteriana

• Isolamento de organismos vivos.
• Tipos de amostras: pulmão.
• Prós:
  • Pode ser efectuado em qualquer laboratório (incluindo internamente).
  • O biótipo I requer NAD (normalmente fornecido por uma colónia de Staphylococcus aureus em cultura).
  • O biótipo II não necessita de NAD.
  • Custo relativamente baixo.
• Contras:
  • Nem sempre é fácil de cultivar.
  • Não identifica o serótipo.
  • Se os suínos tiverem sido pré-tratados com antibióticos, tal pode impedir o crescimento bacteriano.

Susceptibilidade antimicrobiana (antibiograma)

• Teste in vitro: capacidade de um organismo vivo crescer sob concentrações específicas de diferentes antimicrobianos.
• Tipos de amostras: pulmão.
• Prós:
  • Identificação da susceptibilidade ou resistência de estirpes específicas a agentes antimicrobianos comuns.
  • Identificação de tendências de resistência antimicrobiana.
• Contras:
  • Requer um isolado bacteriano.
  • Os testes in vitro podem diferir ligeiramente dos resultados in vivo.
  • Alguns antimicrobianos específicos podem não estar incluídos ou podem exigir testes especiais separados.
  • Custo moderado.

Reacção em cadeia da polimerase (PCR) Geral ou Serotipagem

• Detecta a presença de sequências específicas de ácido nucleico (ADN) bacteriano.
• Tipos de amostras: pulmão e amígdala.
• Prós:
  • Alta sensibilidade.
  • Geral
    • Tem como alvo os genes da toxina ApxIV.
    • Presente em todos os serotipos de APP.
  • Serotipagem
    • Tem como alvo diferentes partes dos genes das toxinas ApxI, ApxII e ApxIII.
    • Ver Tabela1 para a serotipagem e a produção de toxinas.
  • Custo moderado.
  • As amostras de tecido podem frequentemente ser agrupadas para reduzir o custo e minimizar a perda de sensibilidade.
• Contras:
  • Requer vários iniciadores específicos para determinar o serótipo.
  • Nem todas as estirpes podem ser tipadas.
    • Existem actualmente 19 serótipos identificados e este número continuará a aumentar.
  • Nem todos os testes estão validados para testar amostras de amígdalas.

Tabela 1: Produção de toxinas para cada serótipo.

	Produção de toxinas
Serótipo	ApxI	ApxII	ApxIII	ApxIV
1	X	X		X
2		X	X	X
3		X	X	X
4		X	X	X
5	X	X		X
6		X	X	X
7		X		X
8		X	X	X
9	X	X		X
10	X			X
11	X	X		X
12		X		X
13		X		X
14	X			X
15		X	X	X
16	X	X		X
17		X		X
18		X		X
19		X		X

Ensaio por imunoabsorção ligado a enzimas (ELISA) Antígeno LPS-O

• Detecta a presença de anticorpos.
• Tipos de amostras: soro.
• Alvo: antigénio LPS-O.
• Prós:
  • Pode ser útil para ajudar na serotipagem.
  • Alta sensibilidade.
• Contras:
  • Grande quantidade de reatividade cruzada entre serótipos devido à partilha de epítopos capsulares e do antigénio LPS-O.
    • Os seguintes serótipos apresentam reação cruzada devido à partilha de antigénios LPS-O:
      • Reação cruzada entre os serótipos 1, 9 e 11.
      • Reação cruzada entre os serótipos 3, 6, 8, 15, 17 e 19.
      • Reação cruzada entre os serótipos 4, 7 e 18.
  • Não determina o serótipo específico com um único teste.
  • Muito dispendioso e pouco prático para testar todos os serótipos.

Ensaio por imunoabsorção ligado a enzimas (ELISA) Antigénio ApxIV

• Detecta a presença de anticorpos.
• Tipos de amostras: soro.
• Alvo: antigénio ApxIV.
• Prós:
  • Elevada sensibilidade.
  • Detecta todos os serotipos de APP.
• Contras:
  • Não determina o serótipo específico.
  • Não determina a virulência das estirpes.

Interpretação de resultados:

Patologia macroscópica

• Positivo: O diagnóstico presuntivo é frequentemente suficiente.
• Negativo: Ausência de lesões pulmonares macroscópicas.

Cultura bacteriana

• Positivo:
  • Biótipo 1: dependente de NAD.
  • Biótipo 2: Independente de NAD.
• Negativo: Negativo ou animal possivelmente previamente tratado com antibióticos.

Susceptibilidade antimicrobiana (antibiograma)

• Susceptível: possível boa escolha para tratamento se o antimicrobiano conseguir atingir o tecido-alvo.
• Resistente: deve ser selecionado um antimicrobiano diferente.
• CIM: se for efectuada a CIM (concentração inibitória mínima), certifique-se de que o antimicrobiano seleccionado atinge o valor de CIM indicado no órgão-alvo.

PCR

• Positivo:
  • Organismo presente.
  • Pode identificar a presença de diferentes genes que ajudam à serotipagem.
• Negativo:
  • Negativo ou infecção demasiado antiga.
  • O animal pode ter sido previamente tratado com antibióticos.
  • Nem todas as estirpes podem ser serotipadas (não tipáveis).

ELISA Antigénio LPS-O

• Positivo: ajuda a determinar o serótipo ou a identificar um grupo de serótipos.
• Negativo: negativo, infecção demasiado antiga ou animal possivelmente tratado previamente com antibióticos.

ELISA Antigénio ApxIV

• Positivo: organismo presente.
• Negativo: negativo, infecção demasiado antiga ou animal possivelmente tratado previamente com antibióticos.

Cenários:

Porcos de engorda com morte súbita ou doença respiratória (aguda)

• Efetuar a necropsia de 1 a 3 suínos mortos recentemente ou proceder à eutanásia de suínos com tosse. Avaliar macroscopicamente os pulmões para detectar áreas de consolidação necro-hemorrágica acompanhadas de pleurite fibrinosa.
• Enviar os pulmões afectados para cultura bacteriana e teste geral de PCR para detecção de APP e, se for positivo, efectuar a PCR de serotipagem.

Estabelecer o estado negativo da exploração

• Colher amostras de 30 dos maiores suínos de engorda da exploração e testá-las 2-3 vezes por ano utilizando ApxIV ELISA.