Diagnóstico laboratorial: Diarreia Epidémica Suína (DES)

Testes disponíveis

Reacção em cadeia da polimerase (PCR)

• Detecta a presença de uma sequência específica de ácido nucleico (ARN) viral.
• Tipos de amostras: tecidos intestinais, fezes, esfregaços rectais, fluidos orais, etc.
• Prós:
  • Sensibilidade muito elevada (pode detectar pequenas quantidades de vírus).
  • Detecção precoce: os casos agudos devem ser positivos.
  • Podem ser utilizados muitos tipos diferentes de amostras (tecidos intestinais, fezes, esfregaços rectais, fluidos orais, etc.).
  • Custo moderado:
    • Frequentemente, podem ser combinadas 10 amostras de fezes/esfregaços de fezes ou tecido intestinal para reduzir os custos e minimizar a perda de sensibilidade.
    • Normalmente, não se fazem agregações de amostras de fluidos orais porque o valor Ct (número de ciclos necessários para amplificar o ARN viral até um nível detectável) será mais elevado (porque as concentrações de vírus são mais baixas), o que pode resultar numa perda significativa de sensibilidade.
• Contras:
  • É necessária a sequenciação para diferenciar o vírus da vacina da infecção por vírus de campo.
  • A contaminação ambiental pode gerar muitos resultados positivos: os suínos infectados libertam grandes quantidades de vírus.

Ensaio por imunoabsorção ligado a enzimas (ELISA)

• Detecta a presença de anticorpos.
• Tipos de amostras: soro, fluidos orais.
• Prós:
  • Os animais permanecem positivos durante várias semanas, especialmente a IgA nos fluidos orais.
  • Pode ser utilizado em casos crónicos.
• Contras:
  • Pode haver diferenças na detecção entre diferentes testes.
  • Demora 7-14 dias para os animais se tornarem seropositivos.
  • Não distingue entre anticorpos maternos e de exposição.
  • Não distingue entre vacinação e infecção por vírus de campo.
  • É melhor ter um ELISA que detecte os níveis de IgA, especialmente em fluidos orais.

Imunohistoquímica (IHC)

• Detecta a presença de antigénio viral.
• Tipos de amostras: tecidos intestinais.
• Prós:
  • Detecta o vírus no local da lesão (boa prova de causalidade).
  • Permite a diferenciação entre quantidades baixas, moderadas e elevadas de vírus presentes.

• Contras:
  • Tem de ser apresentada a amostra de tecido correcta.
  • Requer muito mais vírus do que a PCR.
  • Avalia apenas uma pequena quantidade de tecido.
  • Nos leitões, as vilosidades intestinais são rapidamente destruídas, resultando em alterações dramáticas na quantidade de vírus presente (coloração) em apenas 2 dias.

Anticorpos fluorescentes indirectos (IFA)

• Detecta a presença de anticorpos.
• Tipos de amostras: soro.
• Vantagens:
  • Alta sensibilidade de detecção.
• Contras:
  • Não é viável para um grande número de amostras.
  • Os resultados dependem do isolado viral utilizado no teste.
  • A fiabilidade depende muito da competência do técnico e varia significativamente entre laboratórios.

Interpretação de resultados

PCR

• Positivo: O vírus está presente. A vacinação recente com um vírus vivo modificado pode dar resultados positivos na PCR. São libertadas grandes quantidades de vírus após a infecção (valores Ct muito baixos; um dígito), especialmente em suínos jovens. A eliminação e a contaminação ambiental podem ocorrer durante um longo período de tempo.

Tabela 1. Os porcos infectados eliminam grandes quantidades de vírus nas fezes (valores Ct de apenas um dígito na PCR) o que provoca uma grande contaminação ambiental.

Ct PCR de DEP versus número de cópias genómicas
42	1
39	10
36	100
32	1.000
29	10.000
26	100.000
22	1.000.000
19	10.000.000
16	100.000.000
12	1.000.000.000
9	10.000.000.000
6	100.000.000.000

• Negativo: Negativo ou o vírus não é detectado se o teste for realizado muito tempo após a infecção.

ELISA

• Positivo: Anticorpos maternos ou exposição prévia (normalmente > 7-14 dias) à vacina ou ao vírus selvagem.
• Negativo: Negativo, infecção demasiado recente para ser detectada (normalmente deve ser pelo menos 7-14 dias após a exposição) ou decorreu demasiado tempo após a infecção (especialmente se for medida a IgG sérica).

IHC

• Positivo: O vírus está presente no local da lesão.
• Negativo: Negativo ou infecção demasiado antiga para detectar o vírus.

IFA

• Positivo: Anticorpos maternos ou exposição prévia (normalmente > 7-14 dias) à vacina ou ao vírus selvagem.
• Negativo: Negativo à vacina ou ao vírus selvagem ou infecção demasiado recente para ser detectada (normalmente deve ser pelo menos 7-14 dias após a exposição).

Cenários

Diarreia em leitões com mortalidade muito elevada na sala de maternidade

• Recolha de intestinos de 2-5 leitões para testes histológicos e de IHC.
• Recolha de intestinos ou conteúdo fecal/esfregaços de 5 leitões e analisar como um pool por PCR.

Marrãs com diarreia +/- vómitos

• Recolha de fluidos orais de 2 a 4 parques diferentes e testá-los individualmente por PCR. Não criar grupos de amostras para teste.
• Recolha de 10-15 esfregaços rectais de porcas com sinais clínicos ou recolher amostras aleatoriamente e testá-las por PCR. As amostras podem ser agrupadas em grupos de 5 para a PCR.

Testes em marrãs isoladas após exposição ao vírus vivo da DES antes da introdução na exploração como reprodutoras

• Não se recomenda a realização de testes, uma vez que a contaminação ambiental será elevada e as marrãs apresentarão resultados positivos nas fezes ou nos fluidos orais durante várias semanas, mesmo depois de terem deixado de excretar o vírus e de ser seguro introduzi-las na exploração de reprodução.

Porcos de engorda com diarreia aguda pós-desmame

• Recolha de fluidos orais de 2 a 4 parques diferentes e testá-los individualmente por PCR. Não criar grupos de amostras para teste.
• Recolha de 10-15 esfregaços rectais de porcas com sinais clínicos ou recolha de amostras aleatoriamente e testá-las por PCR. As amostras podem ser agrupadas em grupos de 5 para a PCR.