Diagnóstico laboratorial: Rotavírus

Existem três grupos principais de rotavírus que causam diarreia nos suínos: Rotavírus A, Rotavírus B e Rotavírus C. Cada grupo de vírus é diferente dos outros e requer testes específicos concebidos para eles. A diarreia nos suínos envolve frequentemente infecções com vários grupos de rotavírus ao mesmo tempo.

Testes disponíveis

Patologia macroscópica

• Avalia a presença de estreitamento da parede do intestino delgado que pode sugerir a presença de doença.
• Localização das lesões: jejuno e íleo.
• Prós:
  • Resultados rápidos e com boa relação custo-benefício.
  • Aplicável aos três grupos de rotavírus.
• Contras:
  • Não diagnóstico - podem ser encontradas lesões semelhantes noutras doenças, especialmente em infecções por coronavírus (gastroenterite transmissível, diarreia epidémica porcina e delta-coronavírus porcino).
  • Requer tecidos frescos (<15 min), uma vez que a decomposição altera drasticamente o aspeto do intestino delgado
  • Não distingue os diferentes grupos de rotavírus

Histopatologia

• Avalia a presença de lesões tecidulares (atrofia das vilosidades no intestino delgado) que podem sugerir fortemente a presença de doença.
• Tipos de amostras: tecido do jejuno e do íleo.
• Prós:
  • Confirma a atrofia das vilosidades sugestiva de enterite viral.
• Contras:
  • É necessária a fixação dos tecidos intestinais com formalina nos 15 minutos seguintes à morte do animal. O tecido intestinal decompõe-se rapidamente.

Imunohistoquímica (IHC)

• Detecta a presença de antigénio viral.
• Tipos de amostras: tecido do jejuno e do íleo.
• Prós:
  • Diagnóstico definitivo: pode confirmar a presença do vírus com lesões associadas.
• Contras:
  • Actualmente apenas disponível para o Rotavírus A e o Rotavírus C (não disponível para o Rotavírus B).

Reacção em cadeia da polimerase (PCR)

• Detecta a presença de uma sequência específica de ácido nucleico (ARN) viral.
• Tipos de amostras: tecidos intestinais do jejuno e do íleo, esfregaços fecais, fezes.
• Prós:
  • A PCR multiplex pode detectar diferentes grupos de rotavírus, incluindo o rotavírus A, o rotavírus B e o rotavírus C.
  • Elevada sensibilidade.
  • Quantificação por PCR
  • Custo moderado
  • As amostras de fezes ou de tecidos podem frequentemente ser agrupadas para reduzir o custo e minimizar a perda de sensibilidade (especialmente para relevância clínica).
• Contras
  • Sensibilidade elevada - pode confirmar a presença do vírus mas não a doença (elevada prevalência do vírus no ambiente).

Isolamento do vírus

• Isolar o vírus vivo.
• Tipos de amostras: tecidos intestinais do jejuno e do íleo, esfregaços fecais, fezes.
• Prós:
  • Isolamento do vírus para utilização no desenvolvimento de vacinas (vacinas autógenas).
• Contras:
  • Caro
  • Resultados lentos
  • Apenas disponível actualmente para o rotavírus A e não para o rotavírus B ou o rotavírus C
  • Frequentemente difícil de cultivar (muitos falsos negativos)
  • O manuseamento das amostras do campo para o laboratório pode afectar a sobrevivência do vírus

Ensaio por imunoabsorção ligado a enzimas (ELISA)

• Detecta a presença de anticorpos.
• Tipos de amostras: soro.
• Prós:
  • Os animais permanecem positivos durante várias semanas
  • Pode identificar explorações negativas
• Contras:
  • A elevada prevalência do vírus no ambiente resulta numa exposição comum em muitos/quase todos os suínos.
  • Exige um teste específico para cada grupo de rotavírus
  • Não há protecção cruzada entre diferentes grupos de rotavírus

Tabela 1. Resumo dos testes aplicáveis relativamente aos diferentes grupos de rotavírus.

	Rotavírus A	Rotavírus B	Rotavírus C	Permite diferenciar entre grupos?
Patologia macroscópica	Sim	Sim	Sim	Não
Histopatologia	Sim	Sim	Sim	Não
Imunohistoquímica (IHC)	Sim	Sim	Sim	Sim
Reacção em cadeia da polimerase (PCR)	Sim	Sim	Sim	Sim
Isolamento do vírus	Sim	Não	Não	Não
Ensaio por imunoabsorção ligado a enzimas (ELISA)	Sim	Não	Não	Não

Interpretação de resultados

Patologia macroscópica

• Positivo: Confirmação preliminar da presença de estreitamento intestinal.
• Negativo: Os casos precoces ou ligeiros podem não manifestar lesões intestinais extensas.

Histopatologia

• Positivo: Confirmação da doença, mas não da causa da doença.
• Negativo: Negativo ou as lesões não são detectadas se o teste for incorrecto ou muito tempo após a infecção.

IHC

• Positivo: O vírus está presente no local da lesão.
• Negativo: Negativo ou o vírus não é detectado se o teste for realizado muito tempo após a infecção ou se a concentração do vírus for demasiado baixa (apenas presente durante um curto período de tempo).

PCR

• Positivo: Confirmação da presença dos diferentes grupos de rotavírus (A, B e C).
• Negativo: Negativo, o vírus não é detectado se o teste for realizado muito tempo após a infecção ou devido a uma selecção ou manuseamento incorrectos da amostra.

Isolamento do vírus

• Positivo: Confirmação da presença do vírus, mas sem doença.
• Negativo: Negativo, o vírus não é detectado se o teste for efectuado muito tempo após a infecção ou simplesmente não pode crescer devido a outra contaminação ou manuseamento incorreto (presente mas muito difícil de cultivar). Não detecta o rotavírus B ou o rotavírus C.

ELISA

• Positivo: Exposição prévia (> 2-4 semanas) à vacina ou ao vírus selvagem.
  • Não há associação entre positividade e doença.
• Negativo:
  • Negativo à vacina ou ao vírus selvagem.
  • Infeção demasiado recente para ser detectada

Cenários

Leitões recém-nascidos com diarreia (aguda ou crónica)

• Recolha de amostras fecais de 10 ou mais leitões não tratados com diarreia e testes PCR para detecção do rotavírus A, rotavírus B e rotavírus C em grupos de 5.
• Necropsia de 1-3 leitões mortos recentemente ou eutanásia de leitões com diarreia. Avaliar macroscopicamente o jejuno e o íleo para detectar o estreitamento da parede intestinal. Recolher espécimes e fibriná-los em formalina para histopatologia e IHC.

Leitões recém desmamados com diarreia (aguda ou crónica)

• Recolha de amostras fecais de 10 ou mais leitões não tratados com diarreia e testes PCR para detecção do rotavírus A, rotavírus B e rotavírus C em grupos de 5.
• Necropsia de 1-3 leitões mortos recentemente ou eutanásia de leitões com diarreia. Avaliar macroscopicamente o jejuno e o íleo para detectar o estreitamento da parede intestinal. Recolher espécimes e fibriná-los em formalina para histopatologia e IHC.