Experiência prática: detecção da infecção por PRRS em varrascos de acordo com o tipo de amostra

Uma das vias possíveis de transmissão do vírus da PRRS, e a que gera maior impacto, é a entrada de doses de sémen de varrascos infectados. Uma das chaves para reduzir o risco que representa esta via de transmissão é um programa de controlo adequado no centro de inseminação. A técnica de PCR é geralmente utilizada para determinar a presença ou ausência do vírus em amostras biológicas de varrascos e a escolha do tipo de amostra a analisar é provavelmente um dos pontos críticos que determinará o sucesso do programa implementado no centro.

As diferentes publicações científicas indicam as seguintes particularidades na dinâmica da infeção e excreção do vírus da PRRS nos varrascos:

• a detecção no sangue é geralmente mais precoce do que a detecção no sémen;
• a excreção através da via seminal é:
  • errática: nem em todos os varrascos com viremia o vírus é detectado no sémen;
  • intermitente: a fase de excreção pode durar meses.

O sémen, devido às suas características, como a presença de inibidores da PCR, pode dificultar a realização da técnica de PCR.

Assim, parece que a amostra ideal seria a colheita de sangue, mas a colheita convencional de sangue através da veia femoral, numa base rotineira e frequente, pode causar problemas para o bem-estar dos varrascos devido ao risco de flebite no local da punção.

Para reduzir este problema, existem alternativas possíveis a este tipo de amostragem, tais como:

• zaragatoa nasal ou oral;
• punção com uma agulha de baixo calibre e subsequente recolha do sangue com uma zaragatoa sem meio.

Para avaliar a eficácia de possíveis amostras e técnicas a introduzir num programa de monitorização em varrascos, a positividade e a carga viral foram determinadas individualmente com a técnica de PCR, num lote de 30 varrascos de uma exploração que tinha sido infectada com o vírus da PRRS, a partir das seguintes amostras:

• sangue proveniente de extracção convencional em tubo de vácuo por punção da veia femoral (Foto 1);
• esfregaço de sangue obtido por micropunção na veia auricular e introdução do esfregaço em 0,5 ml de solução salina estéril (Foto 3);
• sangue do cartão FTA® obtido por micropunção na veia auricular (Foto 4);
• zaragatoa oral ou de saliva;
• sémen não diluído.

Os resultados determinaram que:

• 93% dos varrascos apresentaram resultados positivos na amostra de sangue da veia femoral convencional;
• 90% dos varrascos foram positivos na zaragatoa de sangue por micropunctura, sendo as cargas virais inferiores às obtidas no tubo de sangue e um varrasco foi positivo na colheita de sangue convencional e negativo na zaragatoa de sangue;
• 25% das amostras de sémen foram positivas, sendo os varrascos positivos no sémen todos virémicos e também os varrascos com as cargas virais mais elevadas no sangue, as cargas virais no sémen eram mais baixas em comparação com as cargas virais no sangue dos mesmos varrascos;
• 33% dos varrascos foram positivos por esfregaço oral, as cargas virais dos positivos eram mais baixas em comparação com as cargas virais no sangue;
• 23% dos cartões FTA® foram positivos com cargas virais baixas, tal como para as amostras de sémen, os animais positivos para os cartões FTA® eram os que apresentavam as cargas virais mais elevadas nas amostras de sangue obtidas pelo método convencional.

Conclusões e perspectivas de futuro

• Para a detecção precoce da presença do vírus, um programa baseado apenas na amostragem do sémen pode aumentar o tempo de detecção.
• Cargas virais baixas em amostras de sémen podem gerar resultados de PCR falsos negativos, dependendo de factores como a diluição do sémen colhido, a homogeneidade da amostra colhida, a capacidade de detecção do kit de PCR, o protocolo de PCR utilizado, etc.
• O esfregaço de sangue obtido por micropunctura pode ser uma boa alternativa à colheita de sangue convencional. Estudos futuros poderão determinar a forma de aumentar a capacidade de detecção, dependendo do tipo de zaragatoa utilizada para obter uma maior absorção de sangue e da quantidade de solução salina estéril em que a zaragatoa é introduzida para reduzir a diluição.
• Os cartões FTA® não parecem ser um bom tipo de amostra com base nos resultados deste estudo, embora o facto de a positividade ser detectada quando a carga viral no sangue é elevada encoraje a realização de estudos futuros centrados na melhoria do protocolo de amostragem e na extracção da fracção de sangue do cartão.