Diagnóstico laboratorial: Disenteria suína (Brachyspira hyodysenteriae)

Exames disponíveis:

Cultura bacteriana

• Isolamento de organismos vivos.
• Tipo de amostra: fezes.
• Vantagens:
  • Relativamente pouco dispendioso.
  • A presença de Brachyspira spp. fortemente beta-hemolítica está associada à virulência.

Tabela 1: Relação entre a beta-hemólise na Brachyspira spp. e a doença

Brachyspira spp.	Beta-hemólise	Doença
B. hyodysenteriae	Forte	Lesões da disentería suína
B. hampsonii	Forte	Lesões da disentería suína
B. suanatina	Forte	Lesões da disentería suína
B. pilosicoli	Fraca	Colite por espiroquetas
B. murdochii	Fraca	Colite por espiroquetas
B. intermedia	Fraca	Colite por espiroquetas
B. innocens	Fraca	Não patogénica

• Contras:
  • Menos sensível do que o teste PCR.
  • Crescimento lento (até 10 dias).
  • Requer cultura anaeróbia.
  • Algumas estirpes menos virulentas podem ser encontradas em explorações sem sinais clínicos ou lesões.

Susceptibilidade antimicrobiana

• Exame in vitro: capacidade de um organismo vivo crescer sob concentrações específicas de diferentes antimicrobianos.
• Tipo de amostra: fezes.
• Prós:
  • Identificação da susceptibilidade ou resistência a estirpes específicas a agentes antimicrobianos comuns.
• Contras:
  • Requer um isolado bacteriano.
  • Os testes in vitro podem diferir ligeiramente dos resultados in vivo.
  • Alguns antimicrobianos específicos podem não ser incluídos ou podem exigir testes especiais separados.
  • Custo moderado.
  • Os resultados demoram 7 dias.

Histopatologia

• Avalia a presença de lesões nos tecidos que podem confirmar a presença de doença.
• Tipo de amostra: tecidos.
• Prós:
  • As lesões histopatológicas podem ser altamente sugestivas se forem encontradas muitas espiroquetas perto de lesões intestinais.
  • Pode detectar formas ligeiras da doença.
• Contras:
  • É necessária a fixação em formol dos tecidos intestinais de um animal recentemente morto.
  • As lesões são semelhantes às de outras doenças.

Esfregaços de impressão

• Detecta a presença de bactérias.
• Tipos de amostras: tecido do intestino grosso, fezes.
• Prós:
  • Fácil de executar.
  • Coloração não específica.
  • Microscopia de campo escuro.
  • O diagnóstico provisório pode ser feito através da detecção de um grande número de espiroquetas.
    • 
    • Pode identificar quantidades baixas, moderadas ou altas de bactérias presentes.
• Contras:
  • Exige a presença de um número significativamente maior de bactérias do que a cultura ou a PCR.
  • Não avalia a capacidade hemolítica dos isolados e, por conseguinte, não distingue entre estirpes não patogénicas, colite espiroqueta e disenteria suína.

Reacção em cadeia da polimerase (PCR)

• Detecta a presença de uma sequência específica de ácido nucleico (ADN) bacteriano.
• Tipos de amostras: tecido intestinal, esfregaços fecais, fezes.
• Vantagens:
  • Elevada sensibilidade.
  • A quantificação da PCR está associada à presença de lesões.
  • Custo moderado.
  • As amostras de fezes ou de tecido podem frequentemente ser combinadas para reduzir os custos e minimizar a perda de sensibilidade (especialmente no que respeita à relevância clínica).
• Contras:
  • Alta sensibilidade – confirma a presença de bactéria mas não de doença.
  • São necessários primers adequados para detectar e diferenciar entre Brachyspira spp.

Ensaio por imunoabsorção ligado a enzimas (ELISA)

• Detecta a presença de anticorpos.
• Tipo de amostra: soro.
• Prós:
  • Pode detetar a infecção ao nível da exploração agrícola.
  • Os anticorpos podem durar vários meses.
  • Os níveis de IgG no soro estão correlacionados com a duração dos sinais clínicos.
• Contras:
  • Os testes não estão imediatamente disponíveis.
  • Baixa sensibilidade e especificidade.
  • Utilizados para a detecção a nível da exploração e não para o diagnóstico individual do animal.
  • Os anticorpos específicos e o momento da detecção podem variar ligeiramente entre os kits disponíveis no mercado.
  • Muitas vezes, os antigénios utilizados podem ser específicos de determinadas espécies de Brachyspira.
  • Não existe correlação entre os níveis de anticorpos e a protecção.
  • Desconhece-se a protecção cruzada entre Brachyspira spp.

Interpretação de resultados:

Cultura bacteriana

• Positivo: presença de bactérias.
  • Beta-hemólise forte - disenteria suína.
  • Beta-hemólise fraca - colite por espiroquetas ou não patogénica.
• Negativo: Negativo, o animal pode ter sido previamente tratado com antibióticos ou ter sido tratado demasiado tarde na infecção.

Susceptibilidade antimicrobiana

• Susceptível: possível boa escolha para tratamento se o antimicrobiano conseguir atingir o tecido-alvo.
• Resistente: deve ser selecionado um antimicrobiano diferente.
  CIM: se for efectuada a CIM (concentração inibitória mínima), certifique-se de que o antimicrobiano seleccionado atinge o valor de CIM indicado no órgão-alvo.

Histopatologia

• Positivo: A presença de espiroquetas junto das lesões constitui um diagnóstico presumível.
• Negativo: Não há lesões intestinais.

Esfregaço de impressão

• Número de espiroquetas presentes:
  • Elevado: altamente sugestivo de doença.
  • Moderado: interpretação variável.
  • Baixo: valor duvidoso (pode ser uma condição não patogénica ou crónica).
  • Não presente: animal possivelmente tratado anteriormente com antibióticos ou contribuinte não significativo.

PCR

• Positivo: confirma a presença de bactéria.
• Negativo: Negativo ou infecção muito antiga para detectar a bactéria ou animal tratado previamente com antibióticos.

ELISA

• Positivo: Exposición anterior (>2-4 semanas) a vacina ou bactéria de campo.
• Negativo:
  • Negativo a vacina ou bactéria de campo.
  • Infecção muito antiga para ser detectada.
  • O uso de antibióticos pode inibir o crescimento bacteriano e diminuir a resposta imunitária.

Cenários:

Porcos de engorda com diarreia (aguda)

• Recolher amostras fecais de 10 ou mais suínos com diarreia não tratados com antibióticos e submetê-las a cultura bacteriana e PCR em grupos de 5.
• Efetuar a necropsia de 1-3 suínos mortos recentemente ou eutanasiar os suínos com diarreia. Avaliar macroscopicamente o intestino grosso (especialmente o ceco e o cólon espiral) e fixá-lo em formalina para histopatologia.

Antecedentes crónicos de diagnóstico de disenteria suína mas sem sinais clínicos observados

• Recolher amostras de fezes de 4-6 parques e enviar para PCR.
  • Recolher amostras de 15-20 suínos às 14 e 18 semanas de idade.
  • Duas abordagens à recolha:
    • Transversal - recolha de amostras de diferentes grupos etários ao mesmo tempo (obtém resultados mais rapidamente).
    • Longitudinal - recolha dos mesmos suínos ao longo do tempo (resultados mais exactos).
  • Análise de amostras de soro por ELISA.