Diagnóstico laboratorial: Mycoplasma hyopneumoniae

Testes disponíveis:

Patologia macroscópica

• Inspecção visual de lesões pulmonares.

• Prós:
  • Fácil de fazer.
  • Pode avaliar infecções tardias em porcos enviados para o matadouro.
• Contras:
  • Não diagnóstico/patognomónico, muitas outras possíveis causas.
  • Requer outra confirmação diagnóstica.

Cultura bacteriana

• Isolamento de organismos vivos a partir de tecidos com lesões ou lavagem bronco-alveolar.
• Tipos de amostras: pulmão ou lavagem bronco-alveolar.
• Prós:
  • Critério de referência.
  • Os porcos podem acusar positivo durante 7-8 meses (longo periodo de colonização).
• Contras:
  • Requer um meio de cultura especial (meio Friis).
  • Apenas disponível em poucos laboratórios.
  • Caro.
  • Muito difícil de cultivar (muitos falsos negativos).

Imunohistoquímica (IHC)

• Detecta a presença de antigénio bacteriano.
• Tipo de amostra: tecido pulmonar.
• Prós:
  • Detecta bactérias no local da lesão (boa prova de causalidade).
  • Os porcos podem acusar positivo durante 7-8 meses (longo periodo de colonização).
• Contras:
  • Tem que ser enviada a amostra de tecidos correcta - o tecido pulmonar deverá conter uma secção transversal das vias respiratórias (células epiteliais bronquiais).
  • Requer que haja uma quantidade de bactérias significativamente maior que a PCR.
  • Apenas avalia uma pequena quantidade de tecido.

Anticorpos fluorescentes (FA)

• Detecta a presença de antigénio bacteriano.
• Tipo de amostra: tecido pulmonar.
• Prós:
  • Detecta o vírus no local da lesão (boa prova de causalidade).
  • Os porcos podem acusar positivo durante 7-8 meses (longo periodo de colonização).
• Contras:
  • Tem que ser enviada a amostra de tecidos correcta - o tecido pulmonar deverá conter uma secção transversal das vias respiratórias (células epiteliais bronquiais) (Figura 2).
  • Requer que haja uma quantidade de bactérias significativamente maior que a PCR.
  • Apenas avalia uma pequena quantidade de tecido.

Reacção em cadeia da polimerase (PCR)

• Detecta a presença de sequências específicas de ácido nucleico bacteriano (ADN).
• Tipos de amostras: pulmão, zaragatoa (nasal, laríngeo, traqueo-bronquial ou bronquial) ou lavagem bronco-alveolar.
• Prós:
  • Sensibilidade muito alta (pode detectar pequenas quantidades de bactéria)
  • Podem ser combinadas múltiplas amostras para aumentar a sensibilidade diagnóstica ao fazer um diagnóstico de exploração.
  • Os porcos podem acusar positivo durante 7-8 meses (longo periodo de colonização).
  • Custo moderado.
• Contras:
  • Não demonstra a doença.
  • Os fluídos orais são um tipo de amostra deficiente (muitos falsos negativos)

Tabela 1: Resumo esquemático da investigação e os resultados de campo sobre a sensibilidade de diferentes tipos de amostras para os testes de PCR de Mycoplasma hyopneumoniae.

	Sensibilidade relativa	Pooling*
Fluidos orais	-	Não
Zaragatoa nasal	+	Variável
Zaragatoa laríngeo	++	Benéfico
Zaragatoa traqueo-bronquial	++	Benéfico
Zaragatoa bronquial	+++	Benéfico
Lavagem bronco-alveolar	++	Não
Tecido pulmonar	++++	Sim

* O pooling, ou agrupar amostras, pode ser benéfico para aumentar a sensibilidade diagnóstica ao realizar um diagnóstico de exploração, não apenass de um porco.

Ensaio por imunoabsorção ligado a enzimas (ELISA)

• Detecta a presença de anticorpos.
• Tipo de amostra: soro.
• Prós:
  • Os animais permanecem positivos durante muito tempo.
  • Pode ser utilizado em casos crónicos.
• Contras:
  • Os anticorpos específicos e o momento da detecção podem variar ligeiramente entre os diferentes kits comerciais disponíveis.
  • Não diferencia entre anticorpos maternais e os de exposição.
  • O nível de anticorpos não está correlacionado com a protecção.
  • A vacinação não induz seroconversão (depende em grande medida da vacina e o ensaio utilizado).
  • Muitos porcos infectados não se seroconvertem.
  • Os anticorpos nem sempre são detectados durante todo o período da infecção.
  • Certa reactividade cruzada com outros Mycoplasmas, especialmente M. flocculare, que não é patogénico e se encontra frequentemente em porcos.

Interpretação de resultados:

Patologia macroscópica:

• Positivo: A patologia macroscópica do pulmão pode proporcionar um possível diagnóstico.
• Negativo: Os casos precoces regra geral não se manifestam com lesões pulmonares extensas.

Cultura bacteriana:

• Positivo: Confirma a doença.
• Negativo: Negativo, a bactéria não é detectada se o teste for realizado muito depois da infecção ou do uso de antibióticos, ou simplesmente não pode crescer devido ao crescimento excessivo de outras bactérias (presente mas muito difícil de cultivar).

IHC:

• Positivo: A bactéria está presente no sítio da lesão.
• Negativo: Negativo ou a infecção demasiado antiga para detectar a bactéria o animal tratado previamente com antibióticos.

FA:

• Positivo: A bactéria está presente no sítio da lesão.
• Negativo: Negativo ou a infecção demasiado antiga para detectar a bactéria o animal tratado previamente com antibióticos.

PCR:

• Positivo: A bactéria está presente, não confirma a doença.
• Negativo: Negativo ou infecção demasiado antiga para detectar a bactéria ou animal tratado previamente com antibióticos.

ELISA:

• Positivo: Anticorpos maternais ou exposição anterior (normalmente de 3 a 8 semanas pós-exposição) a vacina ou bactéria de campo.
• Negativo: Negativo ou infecção que não estimula a seroconversão ou demasiado recente para ser detectada (geralmente leva de 3 a 8 semanas pós-exposição).

Cenários

Porcos de engorda com tosse crónica:

• Necrópsia 1-3 porcos mortos recentemente ou eutanásia porcos com tosse. Avaliar macroscopicamente os pulmões em busca de consolidação craneoventral. Recolher vários bocados de pulmão (tem que incluir as vias respiratórias na amostra) e fixá-los em formol para IHC ou FA.
• A percentagem de pulmão com lesões está directamente relacionada com o impacto económico da doença.

Confirmar que os animaies de reposição são negativos a Mycoplasma hyopneumoniae

• Assergurar de que não há sinais clínicos de tosse.
• Recolher pelo menos 30 amostras aleatórias de soro da reposição e analisá-las por ELISA.

Vigiar a excreção na reposição antes de a introduzir numa exploração de reprodutoras positiva ou negativa

• Assegurar de que não haja sinais clínicos de tosse.
• Recolher pelo menos 30 amostras aleatórias de soro da reposição. Misturá-las em grupos de 5 ou 6 e analisar mediante PCR.