Diagnóstico laboratorial: Ileite (Lawsonia intracellularis)

Testes disponíveis:

Patologia macroscópica

• Avalia a presença de lesões tissulares que podem sugerir a presença de doença.
• Localização das lesões: íleo terminal (às vezes pode incluir o ceco).
• Existem 3 formas muito diferentes da doença:
  • Enteropatia hemorrágica proliferativa (aguda/hiperaguda).
    • Engrossamento da mucosa intestinal.
    • Conteúdo hemorrágico com coágulos.

• Adenomatose intestinal suína (crónica sem complicações):
  • Engrossamento intestinal corrugado severo.
  • Normalmente sem sangue.

• Enterite necrótica (crónica com complicações):
  • Engrossamento intestinal corrugado severo.
  • Membrana fibrinonecrótica sobre o intestino engrossado.
  • Normalmente sem sangue.

• Prós:
  • O diagnóstico presuntivo pode ser feito após exame macroscópico dos intestinos.
  • Pode diferenciar as 3 formas diferentes da doença.
  Contras:
  • As lesões não são exclusivas / diagnósticas de ileíte, outras doenças podem causar lesões semelhantes.
  • A avaliação do espessamento pode ser subjectiva, especialmente quando as contracções intestinais fazem as paredes intestinais parecerem temporariamente mais espessas do que o normal.

Histopatologia

• Avalia a presença de lesões tissulares (espessamento) que podem confirmar a presença de doença.
• Tipo de amostra: tecidos.
• Prós:
  • Lesões histopatológicas são quase diagnósticas:
    • A presença de proliferação de células epiteliais imaturas de criptas pode ser confirmada.
    • Pouca ou nenhuma infiltração de células inflamatórias.
    Pode detectar formas leves da doença.
• Contras:
  • Os tecidos intestinais de animais mortos recentemente precisam ser fixados com formol.
  • Às vezes, a doença pode ser segmentar, especialmente nas primeiras etapas.

Imuno-histoquímica (IHC)

• Detecta a presença de antigénio bacteriano.
• Tipo de amostra: tecidos.
• Prós:
  • Critério de referência.
  • Detecta bactérias no local da lesão (bom teste de causalidade).
  • Pode identificar quantidades baixas, moderadas ou altas de bactérias presentes.
• Contras:
  • Requere que haja uma quantidade de bactérias significativamente maior que a PCR.

Reacção em cadeia da polimerase (PCR)

• Detecta a presençia de sequências específicas de ácido nucleico bacteriano (ADN).
• Tipos de amostras: tecidos intestinais, zaragatoas fecais, fezes.
• Prós:
  • Alta sensibilidade.
  • A quantificação por PCR está associada à presença de lesões.
  • Custo moderado:
    • Com frequência podem ser combinadas amostras de fezes ou tecidos para reduzir o custo e minimizar a perda de sensibilidade (especialmente no que respeita à relevância clínica).
• Contras:
  • Alta sensibilidade – confirma a presença de bactérias mas não a doença.
  • Não diferencia entre bactéria de vacina viva e infecção por bactéria de campo.

Ensaio por imunoabsorção ligado a enzimas (ELISA)

• Detecta a presença de anticorpos.
• Tipo de amostra: soro.
• Prós:
  • Os animais permanecem positivos durante várias semanas.
  • Pode ser utilizado em casos crónicos.
  • Maior sensibilidade de diagnóstico que o teste de anticorpos fluorescentes indirectos (IFA).
• Contras:
  • Os anticorpos específicos e o momento da detecção podem variar ligeiramente entre os diferentes kits comerciais disponíveis.
  • Os animais demoram entre 2 e 4 semanas, segundo a carga bacteriana, a ficar seropositivos.
  • Não diferencia entre bactéria de vacina viva e infecção por bactéria de campo.

Anticorpos fluorescentes indirectos (IFA)

• Detecta a presençia de anticorpos.
• Tipo de amostra: soro.
• Prós:
  • Os animais permanecem positivos durante várias semanas.
  • Pode ser utilizado em casos crónicos.
• Contras:
  • Menor sensibilidade de diagnóstico que ELISA.
  • Não é possível realizar num grande número de amostras.
  • Os animais demoram entre 2 e 4 semanas, segundo a carga bacteriana, a ficar seropositivos.
  • Não diferencia entre bactéria de vacina viva e infecção por bactéria de campo.
  • A fiabilidade depende muito da habilidade dos técnicos.

Interpretação dos resultados:

Patologia macroscópica

• Positivo: Muitas vezes, o diagnóstico provável é suficiente.
• Negativo: Sem lesões intestinais macroscópicas.

Histopatologia

• Positivo: Forte associação entre engrossamento e doença.
• Negativo: Sem lesões intestinais.

IHC

• Positivo: A bactéria está presente no local da lesão.
• Negativo: Negativo ou infecção muito recente (bactéria de crescimento lento) ou muito antiga para detectar a bactéria.

PCR

• Positivo:
  • Ct <20 forte vínculo com lesões intestinais (IHC) e doença.
  • Ct>30 indica presença do microorganismo mas não está associada a lesões intestinais (IHC negativo) e, portanto, é provável que não tenha impacto económico nesse momento.
• Negativo: Negativo ou a bactéria não é detectada se o teste é realizado muito cedo (bactéria de crescimento lento) ou muito depois da infecção.

ELISA

• Positivo: Exposição anterior (> 2-4 semanas) a vacina ou bactéria de campo.
• Negativo:
  • Negativo a vacina ou bactéria de campo.
  • Infecção muito recente para ser detectada (bactéria de crescimento lento).
  • O uso de antibióticos pode inibir o crescimento bacteriano e diminuir a resposta imunitária.

IFA

• Positivo: Exposição anterior (> 2-4 semanas) a vacina ou bactéria de campo.
• Negativo:
  • Negativo a vacina ou bactéria de campo.
  • Infecção muito recente para ser detectada (bactéria de crescimento lento).
  • O uso de antibióticos pode inibir o crescimento bacteriano e diminuir a resposta imunitária.

Cenários:

Porcos de engorda com diarreia (aguda ou crónica):

• Recolha de amostras fecais de 10 ou mais porcos com diarreia não tratados com antibióticos e submetê-los a PCR em pools de 5
• Necropsia de 1-3 porcos mortos recentemente ou abatidos, com diarreia. Avaliar macroscopicamente o íleo terminal para espessamento. Recolher uma amostra de íleo e fixá-la em solução de formol para histopatologia e IHQ.

Porcos de engorda que não crescem (crónico):

• Necropsia 1-3 porcos mortos recentemente ou eutanásia de porcos com diarreia. Avaliação macroscópica do íleo terminal à procura de engrossamento. Recolha de amostra de íleo e fixação em solução de formol para histopatologia e IHC.

Determinação do momento de exposição:

• Recolha de amostras de 10-15 porcos até às 8, 11, 14 e 17 semanas de idade:
  • Duas aproximações para a amostragem:
    • Transversal – recolhe de diferentes grupos de idade ao mesmo tempo (obtenção mais rápida de resultados).
    • Longitudinal – recolhe dos mesmos porcos ao longo do tempo (obtenção de resultados mais precisos).
  • Análises de amostras de soro através ELISA (preferível) ou IFA.
  • Análise de amostras fecais através de PCR em pools de 5.