Diagnóstico laboratorial: Doença dos Edemas

Testes disponíveis

Cultivo bacteriano

• Isolamento de organismos vivos.
• Tipo de amostra: fezes, conteúdo intestinal.
• Prós:
  • As bactérias são fáceis de cultivar em 1 dia.
  • Fácil de fazer em qualquer laboratório (mesmo interno).
  • Custo relativamente baixo.
• Contras:
  • Algumas E. coli são parte da flora intestinal normal.
  • Os porcos têm múltiplas E. coli ao mesmo tempo.
  • Se os porcos foram tratados previamente com antibióticos, isto pode impedir o crescimento bacteriano.

Susceptibilidade antimicrobiana (antibiograma)

• Teste in vitro: capacidade de um organismo vivo para crescer sob concentrações específicas de diferentes antimicrobianos.
• Tipo de amostras: fezes, conteúdo intestinal.
• Prós:
  • Identificação de susceptibilidade ou resistência de estirpes específicas a antimicrobianos comuns.
  • Identificação de tendências de resistência aos antimicrobianos.
• Contras:
  • Requer um isolado bacteriano.
  • Os testes in vitro podem diferir ligeiramente dos resultados in vivo.
  • É possível que alguns antimicrobianos específicos não sejam incluídos ou requeiram testes especiais separados.
  • Custo moderado.

Histopatologia

• Avalia a presença de lesões nos tecidos (dano) que possam confirmar a presença de doença. Algumas vezes, também pode ser detectada a presença de organismos directamente (bactérias e parasitas) ou indirectamente (vírus) através de tinções especiais adicionais.
• Tipo de amostra: tecidos.
• Prós:
  • Associa a adesão bacteriana com o dano intestinal.
  • Não é necessária tinção especial.
• Contras:
  • Os tecidos intestinais têm que ser fixados com formol em menos de 15 minutos após a morte do animal já que o tecido intestinal é rapidamente decomposto.
  • A doença pode ser segmentária, pelo que devem ser enviadas múltiplas amostras intestinais.

Genotipado

• Uma técnica PCR (reacção em cadeia da polimerase) que detecta a presença de uma sequência específica de ácidos nucleicos (ADN) associados com genes de virulência conhecidos.
• Prós:
  • Realizado através de PCR; fácil de fazer.
  • Ajuda a identificar a patogenicidade ao detectar a presença de genes (não necessariamente a expressão de genes) associados com factores de virulência.
    • Genes de toxinas: EAST1, LT, STa, STb, Stx1, Stx2, Stx2e.
    • Genes de Pilus: F18, F41, K88 (F4), K99 (F5), 987P (F6).
    • Genes de adesinas: AIDA, EAEA, PAA
  • Facilita a selecção adequada da vacina (em função dos pili).
  • Ajuda a confirmar que o isolado tem genes da doença dos edemas.

Genes de E. coli detectados mediante genotipificação por PCR e pela sua função. Os genes ressaltados em vermelho são importantes para o diagnóstico da Doença dos Edemas.

Gene	Tipo	Descrição
EAST1	Toxina	A toxina intestinal liga-se ao mesmo receptor e estimula a mesma via secretora que a Sta (a causa da diarreia não está bem estabelecida)
LT	Toxina	Toxina Intestinal que estimula a secreção intestinal
STa	Toxina	Toxina intestinal que estimula a secreção intestinal principalmente em porcos jovens (diminui a absorção de água e electrólitos)
STb	Toxina	Toxina intestinal que estimula uma diarreia secretora principalmente em porcos de mais idade (aumenta a secreção dos enterócitos)
Stx1	Toxina	A toxina intestinal pode ser encontrada em estirpes patogénicas e não patogénicas
Stx2	Toxina	A toxina intestinal pode ser encontrada em estirpes patogénicas e não patogénicas
Stx2e	Toxina	Toxina sistémica que induz dano vascular e Doença dos Edemas
F18 (F107)	Adesina	Pili (fimbria) usada para se aderir que está presente após de 20 dias de idade e frequentemente associada com diarreia pós desmame e Doença dos Edemas
F41	Adesina	Pili (fimbria) usada para se aderir principalmente em recém-nascidos
K88 (F4)	Adesina	Pili (fimbria) usada para se aderir desde o nascimento a todas as idades
K99 (F5)	Adesina	Pili (fimbria) usada para se aderir principalmente em recém-nascidos
987P (F6)	Adesina	Pili (fimbria) usada para se aderir principalmente em recém-nascidos
AIDA	Adesina	"Adesina envolvida na aderência difusa" não fimbrial, mais frequentemente encontrada junto a F18
EAE	Adesina	Adesina não fimbrial que contribui para as lesões de "attaching-and-effacing"
PAA	Adesina	Adesina não fimbrial essencial para que se produzam as lesões "attaching-and-effacing"

• Contras:
  • Requere um isolamento bacteriano.
  • Os porcos podem ter mais de uma estirpe ao mesmo tempo, pelo que devemos confiar em que tenhamos isolado a estirpe correcta.
  • Preço moderado, mas normalmente apenas se analisa um isolado.

Interpretação de resultados:

Cultivo bacteriano:

• Deve ser uma E. coli hemolítica.
  
• Pureza:
  • Crescimento puro: altamente sugestivo de que está a contribuir para a doença.
  • Crescimento misto: valor questionável.
• Quantidade:
  • Alta: altamente sugestivo de que está a contribuir para a doença.
  • Moderada: interpretação variável.
  • Baixo: valor questionável (poderia ser um contaminante).
  • Sem crescimento: animal possivelmente tratado previamente com antibióticos ou agente sem contribuição significativa.

Susceptibilidade antimicrobiana (antibiograma):

• Susceptível: possível boa eleição para o tratamento se o antimicrobiano poede chegar ao tecido diana.
• Resistente: há que seleccionar um antimicrobiano diferente.
• MIC: se for realizada a MIC (mínima concentração inibitória) há que se certificar que o antimicrobiano seleccionado alcança o valor MIC indicado no órgão diana.

Histopatologia:

• Positivo: forte associação como causador se for capaz de demonstrar lesões intestinais com E. coli aderida a células epiteliais.

• Negativo: sem lesões intestinais.

Genotipado:

• O genotipado é necessário para confirmar que o isolado tem factores de virulência associados com a Doença dos Edemas.
  • Deve ser F4 ou F18.
  • Deve ter a toxina semelhante a shiga (Stx2e).

Cenário
Porcos com diarreia pós-desmame:

• Recolhe zaragatoas retais de 2 ou mais porcos com diarreia, não tratados com antibióticos e enviá-los para cultivo bacteriano, antibiograma e genotipado.
• Eutanásia 1-3 leitões com diarreia que não tenham recebido tratamento. Imediatamente recolhe 3 amostras de intestino de cada leitão e colocá-las em solução de formol. Recolher amostras intestinais frescas para as enviar refrigeradas para cultivo bacteriológico, antibiograma e genotipado.