Desenvolvimento da técnica LAMP para detecção Toxoplasma gondii em carne de porco

O ensaio de amplificação isotérmica mediada por loop (LAMP) é um novo método que amplifica rapidamente o ADN com uma elevada especificidade e sensibilidade sob condições isotérmicas. Neste estudo, foi estabelecido um ensaio LAMP com 6 primers dirigidos a uma região altamente conservada de Toxoplasma gondii sequência ITS-1.

O protocolo de amplificação foi completado em 30 minutos em condições isotérmicas num banho de água a 65 °C e testes de especificidade não confirmaram reacção cruzada com modelos de ADN de Neospora caninum, Eimeria tenella, Cryptosporidium parvum, Listeria monocytogenes e Streptococcus suis. O limite de detecção do ensaio LAMP foi de 0,9 fg de ADN genómico de T. gondii, uma sensibilidade 10 vezes superior à de um ensaio de PCR convencional. Tanto o ensaio LAMP como a PCR convencional foram aplicados para detectar ADN genómico de T. gondii em 118 amostras de diafragma obtidas de explorações de porcos na província de Zhejiang, China. Os resultados mostraram que o LAMP é mais sensível que a PCR convencional (13,56% e 9,32%).