Praktyka: Możliwość wykrycia zakażenia PRRS u knurów w zależności od rodzaju próbki

Jedną z możliwych dróg przenoszenia wirusa PRRS i tą, która ma największy wpływ, jest wprowadzanie dawek nasienia od zakażonych knurów. Kluczem do zmniejszenia ryzyka związanego z tą drogą transmisji jest odpowiedni program monitorowania w stadzie knurów. Zasadniczo technika PCR jest stosowana do określenia obecności lub braku wirusa w próbkach biologicznych od knurów, a rodzaj próbki wybranej do analizy jest prawdopodobnie jednym z krytycznych punktów, które zadecydują o sukcesie programu wdrożonego w stadzie knurów.

Różne publikacje naukowe wskazują na następujące cechy szczególne w dynamice infekcji i wydalania wirusa PRRS u knurów:

• Wykrycie we krwi zwykle następuje przed wykryciem w nasieniu.
• Siewstwo z nasieniem:
  • Nieregularne: wirus nie jest wykrywany w nasieniu wszystkich wiremicznych knurów.
  • Przerywane: faza siewstwa może trwać miesiącami.

Ze względu na właściwości nasienia, takie jak obecność inhibitorów PCR, wykonanie PCR może być trudne.

Wydaje się więc, że idealną próbką byłaby krew, ale konwencjonalne rutynowe pobieranie krwi z żyły może powodować problemy z dobrostanem knurów ze względu na ryzyko zapalenia żyły w miejscu nakłucia.

Aby ograniczyć ten problem, istnieją możliwe alternatywy dla tego typu pobierania próbek, takie jak:

• Wymazy z nosa lub jamy ustnej
• Nakłucie cienką igłą, a następnie pobranie krwi wacikiem bez podłoża

Aby ocenić skuteczność potencjalnych próbek i technik, które mają zostać wprowadzone do programu monitorowania knurów, dodatni wynik i wiremię określono indywidualnie za pomocą techniki PCR z następujących próbek w partii 30 knurów z fermy, która została zakażona wirusem PRRS:

• Konwencjonalne pobranie krwi za pomocą probówki próżniowej poprzez nakłucie żyły (zdjęcie 1).
• Wymaz krwi uzyskany przez mikronakłucie żyły usznej i wprowadzenie wymazówki do 0,5 ml sterylnego roztworu soli fizjologicznej (zdjęcie 3).
• Karta FTA® z próbką krwi pobraną metodą mikronakłucia żyły usznej (zdjęcie 4).
• Wymaz z jamy ustnej lub ślina.
• Nierozcieńczone nasienie.

Wyniki wykazały, że:

• 93% knurów uzyskało wynik dodatni przy konwencjonalnym pobieraniu krwi z żyły.
• 90% knurów uzyskało wynik dodatni w przypadku mikropunkcji na wymaz z krwi. Miano wirusa było niższe niż uzyskane za pomocą probówki z krwią, a jeden knur uzyskał wynik dodatni przy konwencjonalnym pobraniu krwi i ujemny przy wymazie z krwi.
• 25% próbek nasienia dało wynik dodatni. Wszystkie knury z dodatnim wynikiem nasienia były wiremiczne i miały najwyższe miana wirusa we krwi. Miano wirusa w nasieniu było niższe w porównaniu do miana wirusa we krwi tych samych knurów.
• 33% knurów uzyskało wynik dodatni w wymazie z jamy ustnej. Miana wirusów u knurów z wynikiem dodatnim były niższe niż miana wirusów we krwi.
• 23% kart FTA® dało wynik dodatni z niskim poziomem miana wirusa. Podobnie jak w przypadku próbek nasienia, zwierzęta, które uzyskały wynik dodatni przy użyciu kart FTA®, miały najwyższe miana wirusa w próbkach krwi uzyskanych metodą konwencjonalną.

Wnioski i perspektywy na przyszłość

• W przypadku wczesnego wykrywania obecności wirusa program oparty wyłącznie na pobieraniu próbek nasienia może opóźnić wykrycie wirusa.
• Niskie miano wirusa w próbkach nasienia może powodować fałszywie ujemne wyniki PCR w zależności od takich czynników, jak rozcieńczenie pobranego nasienia, jednorodność pobranej próbki, zdolność do wykrycia wirusa zestawem PCR, zastosowany protokół PCR itp.
• Wymaz krwi uzyskany przez mikronakłucie może być dobrą alternatywą dla konwencjonalnego pobierania krwi. Przyszłe badania mogą określić, w jaki sposób zwiększyć zdolność wykrywania w zależności od rodzaju wacika użytego do osiągnięcia wyższego wchłaniania krwi i w zależności od ilości sterylnej soli fizjologicznej, w której wacik jest wprowadzany w celu zmniejszenia rozcieńczenia.
• Karty FTA® nie wydają się być dobrym typem próbki w oparciu o wyniki tego badania, chociaż fakt, że dodatni wynik jest wykrywany, gdy miano wirusa we krwi jest wysokie, zachęca do przyszłych badań skoncentrowanych na ulepszeniu protokołu pobierania próbek i ekstrakcji frakcji krwi z karty.