Diagnostyka laboratoryjna: epidemiczna biegunka świń (PED)

Dostępne testy

Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR)

• Wykrywa obecność określonej sekwencji wirusowego kwasu nukleinowego (RNA)
• Rodzaje próbek: tkanki jelitowe, kał, wymazy z odbytu, płyny ustne itp.
• Zalety:
  • Bardzo wysoka czułość (możliwość wykrycia niewielkich ilości wirusa)
  • Wczesne wykrywanie - ostre przypadki powinny być dodatnie
  • Można stosować wiele różnych rodzajów próbek (tkanka jelitowa, kał, wymazy z odbytu, płyny ustne itp.)
  • Umiarkowany koszt
    • Często można połączyć 10 próbek kału/wymazów lub próbek tkanki jelitowej, aby obniżyć koszty, jednocześnie minimalizując utratę czułości.
    • Często nie łączy się płynów ustnych ze względu na oczekiwane wyższe wartości Ct (niższe stężenia wirusa), co może skutkować znaczną utratą czułości.
• Wady:
  • Sekwencjonowanie potrzebne do odróżnienia wirusa szczepionkowego od wirusa typu dzikiego
  • Zanieczyszczenie środowiska może generować wiele dodatkowych wyników - duże ilości wirusa są wydalane przez zakażone świnie

Test immunoenzymatyczny (ELISA)

• Wykrywa obecność przeciwciał
  Rodzaje próbek: surowica, płyny ustne
• Zalety:
  • Zwierzęta pozostają dodatnie przez kilka tygodni, zwłaszcza IgA w płynach ustnych
  • Może być stosowany w przypadkach chronicznych
• Wady:
  • Mogą występować różnice w wykrywaniu między różnymi testami
  • Zwierzęta stają się dodatnie serologicznie w ciągu 7-14 dni.
  • Nie można odróżnić przeciwciał matczynych od poinfekcyjnych
  • Nie można odróżnić zakażenia szczepionką od zakażenia wirusem typu dzikiego
  • Najlepiej mieć test ELISA, który wykrywa poziomy IgA, szczególnie w przypadku płynów ustnych.

Immunohistochemia (IHC)

• Wykrywa obecność antygenu wirusowego
• Rodzaje próbek: tkanki jelitowe
• Zalety:
  • Wykrywa wirusa w miejscu uszkodzenia (dobry dowód związku przyczynowego)
  • Potrafi zidentyfikować niskie vs umiarkowane vs wysokie ilości obecnego wirusa

• Wady:
  • Należy dostarczyć prawidłową próbkę tkanki
  • Wymaga obecności znacznie większej ilości wirusa niż PCR
  • Ocena tylko małej próbki tkanki
  • U prosiąt kosmki jelitowe są szybko niszczone, co powoduje dramatyczne zmiany w ilości obecnego wirusa (barwienie) w ciągu zaledwie 2 dni.

Immunofluoerscencja (IFA)

• Wykrywa obecność przeciwciał
• Rodzaje próbek: surowica
• Zalety:
  • Wysoka czułość wykrywania
• Wady:
  • Niewykonalne dla dużej liczby próbek
  • Na wyniki ma wpływ izolat wirusa użyty do testu
  • Rzetelność wyniku w dużym stopniu zależy od umiejętności technika i różni się znacznie między laboratoriami

Interpretacja wyniku

PCR

• Dodatni - wirus jest obecny. Niedawne szczepienie zmodyfikowanym żywym wirusem może skutkować dodatnimi wynikami PCR. Po zakażeniu wydalane są bardzo duże ilości wirusa (bardzo niskie wartości Ct; jednocyfrowe), zwłaszcza u młodych świń. Wydalanie i skażenie środowiska może występować przez długi czas.

Tabela 1. Duże ilości cząstek wirusa są wydalane z kałem zakażonych prosiąt (jednocyfrowe wartości Ct w PCR), co powoduje duże zanieczyszczenie środowiska.

PED PCR Ct a liczba kopii genomowych
42	1
39	10
36	100
32	1,000
29	10,000
26	100,000
22	1,000,000
19	10,000,000
16	100,000,000
12	1,000,000,000
9	10,000,000,000
6	100,000,000,000

• Ujemny - Ujemny lub wirus mógł zostać przeoczony, jeśli test został przeprowadzony późno po zakażeniu.

ELISA

• Dodatni - przeciwciała matczyne lub wcześniejsza ekspozycja (zwykle > 7-14 dni po ekspozycji) na szczepionkę lub wirusa typu dzikiego.
• Ujemny - Ujemny, zakażenie zbyt wcześnie, aby je wykryć (zwykle musi nastąpić co najmniej 7-14 dni po ekspozycji) lub zbyt długo po zakażeniu (szczególnie w przypadku pomiaru IgG w surowicy).

IHC

• Dodatni - wirus jest obecny w miejscu uszkodzenia.
• Ujemny - Ujemny lub infekcja nastąpiła zbyt późno, aby wykryć wirusa

IFA

• Dodatni - przeciwciała matczyne lub wcześniejsza ekspozycja (> 7-14 dni po ekspozycji) na szczepionkę lub wirus typu dzikiego.
• Ujemny - brak odpowiedzi na szczepionkę lub wirusa typu dzikiego lub infekcja zbyt wczesna do wykrycia (musi nastąpić co najmniej 7-10 dni po ekspozycji)

Możliwe scenariusze

Biegunka prosiąt z bardzo wysoką śmiertelnością w porodówce

• Jelita od 2-5 prosiąt do badań histologicznych i IHC
• Jelita lub zawartość kału / wymazy od 5 prosiąt i badanie jako 1 próbka zbiorcza za pomocą PCR

Loszki z biegunką +/- wymioty

• Pobrać płyny ustne z 2 do 4 różnych kojców i przetestować indywidualnie za pomocą PCR. Nie należy łączyć próbek do badań.
• Pobrać od 10 do 15 wymazów z odbytu od świń z objawami klinicznymi lub losowo i przetestować metodą PCR. Można łączyć w grupy po 5 do testów PCR.

Badanie loszek w izolacji po ekspozycji na żywego wirusa PED z gospodarstwa przed wprowadzeniem do stada

• Nie zaleca się przeprowadzania testów, ponieważ skażenie środowiska będzie wysokie, a loszki będą wykazywały dodatni wynik w badaniu kału lub płynów ustnych przez kilka tygodni, nawet po tym, jak przestaną rozsiewać wirusa i będzie można je bezpiecznie wprowadzić do stada hodowlanego.

Warchlak z ostrą biegunką po odsadzeniu

• Pobrać płyny ustne z 2 do 4 różnych kojców i przetestować indywidualnie za pomocą PCR. Nie należy łączyć próbek do badań.
• Pobrać od 10 do 15 wymazów z odbytu od świń z objawami klinicznymi lub losowo i przetestować metodą PCR. Można łączyć w grupy po 5 do testów PCR.