Diagnostyka laboratoryjna: parwowirus

Dostępne testy:

Test immunofluorescencji pośredniej (IFA)

• Wykrywa obecność antygenu wirusowego
• Rodzaje próbek: tkanki (poronione lub zmumifikowane płody)
• Zalety:
  • Wykrywa wirusa w poronionych lub zmumifikowanych płodach (dobry dowód na związek przyczynowy).
  • Każdy dodatni wynik jest uznawany za istotny.
• Wady:
  • Niektóre zmumifikowane tkanki są zbyt rozłożone, aby wykryć wirusa.
  • Wymaga obecności znacznie większej ilości wirusa niż PCR.
  • Często do zakażenia wirusem dochodziło kilka tygodni przed poronieniem lub porodem zmumifikowanych płodów.

Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR)

• Wykrywa obecność określonej sekwencji wirusowego kwasu nukleinowego (DNA)
• Rodzaje próbek: tkanki
• Zalety:
  • Wysoka czułość.
  • Umiarkowany koszt
    • Możliwość łączenia próbek tkanek w celu obniżenia kosztów przy jednoczesnej minimalizacji utraty czułości (zwłaszcza w odniesieniu do znaczenia klinicznego).
• Wady:
  • Wymaga próbek tkanek z poronionych lub zmumifikowanych płodów dla uzyskania najlepszych wyników.
  • Niektóre zmumifikowane tkanki są zbyt rozłożone, by wykryć wirusa.

Test immunoenzymatyczny (ELISA)

• Wykrywa obecność przeciwciał
• Rodzaje próbek: surowica
• Zalety:
  • Zwierzęta pozostają dodatnie przez kilka miesięcy do lat
  • Możliwość badania dużej liczby zwierząt
  • Zaszczepione zwierzęta wytwarzają znacznie niższe poziomy przeciwciał w porównaniu z zakażeniami terenowymi
  • Potrzeba tylko 6-10 dni, aby stać się serododatnim
• Wady:
  • Seroprewalencja jest wysoka, ponieważ patogen jest powszechny
  • Niektóre testy ELISA mogą odróżnić szczepionkę od dzikiego typu wirusa.
    • Szczepionki inaktywowane stymulują jedynie przeciwciała do białek strukturalnych (VP1/VP2)
    • Różnicujące testy ELISA ukierunkowane na białka niestrukturalne (NS)

Hamowanie hemaglutynacji (HI)

• Wykrywa obecność przeciwciał
• Rodzaje próbek: surowica
• Zalety:
  • Zwierzęta pozostają pozytywne przez kilka miesięcy do lat
  • Wyższa czułość niż ELISA (możliwość wykrycia niższego stężenia przeciwciał)
  • Zaszczepione zwierzęta wytwarzają znacznie niższe poziomy przeciwciał w porównaniu z zakażeniami terenowymi
    • Poszczepienne zwykle ≤ 1:500
    • Zakażenie terenowe ≥ 1:2000
  • Zwierzęta wykazują wynik seropozytywny już po 6 dniach od zakażenia.
• Wady:
  • Niewykonalne dla dużej liczby próbek.
  • Wiarygodność w dużym stopniu zależy od umiejętności laboranta.
  • Reaktywność zależy od temperatury inkubacji.

Interpretacja wyników:

IFA

• Dodatni: wirus jest obecny w płodzie
• Ujemny: ujemny lub zakażenie nastąpiło we wczesnym okresie ciąży i jest zbyt późno lub tkanka jest zbyt rozłożona, aby wykryć wirusa

PCR:

• Dodatni: wirus jest obecny w płodzie
• Ujemny: ujemny lub zakażenie nastąpiło we wczesnym okresie ciąży i jest zbyt późno lub tkanka jest zbyt rozłożona, aby wykryć wirusa

ELISA (ELISA różnicująca)

• Dodatni:
  • Niskie wartości - ekspozycja na szczepionkę w przeszłości (>6 dni)
  • Wysokie wartości - niedawne narażenie na wirusa typu dzikiego
• Ujemny: ujemny lub infekcja szczepem terenowym zbyt wczesna do wykrycia.

HI

• Dodatni:
  • Niskie wartości - ekspozycja na szczepionkę w przeszłości (>6 dni)
  • Wysokie wartości - niedawne narażenie na wirusa typu dzikiego
• Ujemny: ujemny lub infekcja szczepem terenowym zbyt wczesna do wykrycia.

Możliwe scenariusze:

Stado loch z niepłodnością i zmumifikowanymi płodami

• Zebrać 4-8 płodów (docelowo zmumifikowane płody) i połączyć próbki do badania PCR.
• Lochy / loszki, które poroniły: pobrać surowicę
  • Jeśli miana HI wynoszą ≥ 1:2000 – potwierdzenie niedawnej infekcji wirusowej
  • W przeciwnym razie ponów badanie za 2-4 tygodnie i porównaj miana w czasie, szukając > dwukrotnego wzrostu.

Stado loch z niepłodnością i NIE zmumifikowanymi płodami:

• Pobrać surowicę od loch roniących i normalnych loch dzisiaj i ponownie zbadać te same zwierzęta za 2-4 tygodnie.
  • Jeśli miana HI wynoszą ≥ 1:2000 – potwierdzenie niedawnej infekcji wirusowej
  • W przeciwnym razie porównaj miana w czasie, szukając > dwukrotnego wzrostu
• Oceń lochy roniące pod kątem rozkładu liczby przebytych porodów
  • Zakażenie parwowirusem jest częstsze u zwierząt w 1. lub 2. ciąży, ponieważ u starszych zwierząt istnieje większe prawdopodobieństwo, że są już odporne.