Diagnostyka laboratoryjna: klasyczny pomór świń (CSF)

Dostępne testy:

Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR)

• Wykrywa obecność określonej sekwencji wirusowego kwasu nukleinowego (RNA)
• Rodzaje próbek: surowica lub tkanki
• Zalety:
  • Najbardziej czuła i preferowana metoda wykrywania patogenu
  • Często może łączyć próbki w celu obniżenia kosztów przy jednoczesnym zminimalizowaniu utraty czułości.
• Wady:
  • Umiarkowany koszt
  • Wymaga odpowiednich starterów

Test fluorescencyjny przeciwciał (FAT)

• Wykrywa obecność wirusa
• Rodzaje próbek: tkanki, zwłaszcza migdałki
• Zalety:
  • Dobra czułość
• Wady:
  • Nie można odróżnić szczepionki od wirusa typu dzikiego
    • Zmodyfikowane żywe szczepionki mogą dawać dodatni wynik FAT przez około 2 tygodnie
  • Niewykonalne w przypadku dużej liczby próbek
  • Na wyniki ma wpływ izolat wirusa użyty do testu
  • Wiarygodność wyniku w dużym stopniu zależy od umiejętności technika

Przeciwciała monoklonalne do różnicowego testu immunoperoksydazy (MAbs)

• Wykrywa obecność wirusa
• Rodzaje próbek: Migdałki lub inny narząd dodatni w FAT
• Wykorzystuje serię trzech różnych przeciwciał monoklonalnych (MAb), aby pomóc odróżnić szczepionkę od infekcji typu dzikiego od innych pestiwirusów
• Zalety:
  • Pomóż odróżnić szczepionkę od infekcji typu dzikiego od innych pestiwirusów
• Wady:
  • Koszt umiarkowany do wysokiego
  • Wymaga próbki tkanki FAT-dodatniej
  • Wymaga wpływu trzech oddzielnych MAb i jednego przeciwciała poliklonalnego (PAb) użytych w teście
    • MAbs które rozpoznają wszystkie izolaty wirusa CSF
    • MAbs, który rozpoznają wszystkie izolaty szczepionki CSF stosowane w tym kraju
    • MAbs, które rozpoznają wirusy biegunki bydła (BVD) i choroby granicznej (BD)
    • PAbs, które rozpoznają CSF
  • Niewykonalne w przypadku dużej liczby próbek
  • Wiarygodność wyniku w dużym stopniu zależy od umiejętności technika

Test immunoenzymatyczny (ELISA)

• Wykrywa obecność przeciwciał
• Rodzaje próbek: surowica
• Zalety:
  • Zwierzęta pozostają dodatnie przez wiele tygodni
  • Może być stosowany w przypadkach przewlekłych
  • Może być stosowany do różnicowania narażenia na wirusa typu dzikiego od szczepionki z delecją genową
  • Każdy dodatni wynik dla wirusa typu dzikiego jest uważany za istotny
• Wady:
  • Jeśli to możliwe, należy dopasować właściwy test do właściwej delecji genu w szczepionce (zwykle E2)
  • Zwierzęta stają się seropozytywne po co najmniej 21 dniach
  • Może mieć reaktywność krzyżową z innymi pestiwirusami

Neutralizacja wirusa (VN)

• Wykrywa obecność przeciwciał
• Rodzaje próbek: surowica
• Zalety:
  • Zwierzęta pozostają dodatnie przez wiele tygodni
  • Może być stosowany w przypadkach przewlekłych
  • Wyższa czułość niż ELISA (może wykryć niższe stężenie przeciwciał)
• Wady:
  • Niewykonalne w przypadku dużej liczby próbek
  • Zwierzęta stają się seropozytywne po co najmniej 21 dniach
  • Nie można odróżnić szczepionki od infekcji typu dzikiego
  • Wiarygodność wyniku w dużym stopniu zależy od umiejętności technika
  • Reaktywność zależy od użytego izolatu wirusa
  • Może mieć reaktywność krzyżową z innymi pestiwirusami

Interpretacja wyników:

PCR

• Dodatni: obecny jest wirus typu dzikiego lub szczepionkowy
• Ujemny: ujemy lub wirus mógł zostać pominięty, jeśli badanie nastąpi późno po zakażeniu

FAT

• Dodatni: obecny jest wirus typu dzikiego lub szczepionkowy
• Ujemny: ujemy lub wirus mógł zostać pominięty, jeśli badanie nastąpi późno po zakażeniu

MAbs -Przeciwciała monoklonalne do różnicowego testu immunoperoksydazy

• Dodatni: Zobacz: Tabela 1
• Ujemny: ujemy lub wirus mógł zostać pominięty, jeśli badanie nastąpi późno po zakażeniu

Tabela 1. Przeciwciała monoklonalne do interpretacji wyników testu różnicowej immunoperoksydazy (MAb). Źródło: OIE

Przeciwciało poliklonalne	Przeciwciało monoklonalne specyficzne dla			Interpretacja
	Szczep CSF	Szczep szczepionkowy CSF	Szczep BVD/BD
+	+	-	-	Szczep dziki CSF
+	+	+	-	Szczep szczepionkowy CSF
+	-	-	+	Szczep BVD/BV
+	-	-	-	Inny Pestivirus* nie-CSF

* Należy zawsze brać pod uwagę istnienie nowych szczepów CSF, a wszelkie izolaty z przypadków, w których nadal istnieje podejrzenie CSF, należy przesłać do laboratorium referencyjnego OIE.

ELISA

• Dodatni: przeciwciała matczyne lub przeszłe narażenie (>21 dni) na wirus typu dzikiego lub szczepionkę
• Ujemny: wynik ujemny lub narażenie na szczepionkę lub wirusa typu dzikiego zbyt wcześnie, aby je wykryć

Tabela 2. Pomaga zademonstrować możliwości DIVA (różnicowanie zaszczepionych od zakażonych) niektórych testów ELISA podczas stosowania szczepionki z delecją genu.

ELISA nieróżnicująca	ELISA-E2 Wynik	Interpretacja
Dodatni	Dodatni	Ekspozycja na wirusa typu dzikiego
Dodatni	Ujemny	Zaszczepione zwierzę nienarażone na wirus typu dzikiego
Ujemny	Dodatni	Błąd testu, wynik niemożliwy
Ujemny	Ujemny	Nie zaszczepiony i nie narażony na wirusa typu dzikiego

VN

• Dodatni: przeciwciała matczyne lub przeszłe narażenie (>21 dni) na wirus typu dzikiego lub szczepionkę
• Ujemny: wynik ujemny lub narażenie na szczepionkę lub wirusa typu dzikiego zbyt wcześnie, aby je wykryć

Możliwe scenariusze

Należy pamiętać, że niektóre kraje mogą wymagać zatwierdzenia przez władze federalne przed wykonaniem jakichkolwiek testów na CSF.

Podejrzenie ostrej epidemii CSF u świń w dowolnym wieku i w stadzie nieszczepionym na CSF

• Pobrać pełną krew od wielu chorych zwierząt i przetestować metodą PCR; można rozważyć łączenie próbek
• Zebrać śledziony i migdałki od martwych świń i przetestować metodą PCR; można rozważyć łączenie próbek

Podejrzenie ostrej epidemii CSF u świń w dowolnym wieku i stadach zaszczepionych przeciwko CSF

• Pobrać pełną krew od wielu dotkniętych chorobą zwierząt, które nie były szczepione na CSF w ciągu ostatnich 2 tygodni i przeprowadzić badanie metodą PCR; można rozważyć łączenie próbek
• Zebrać śledziony i migdałki od martwych świń i przetestować metodą PCR; można rozważyć łączenie próbek
  • Jeśli tkanka jest dodatnia w reakcji PCR, zbadać za pomocą testu FAT i MAbs

Podejrzenie przewlekłego krążenia CSF u świń w każdym wieku bez śmiertelności, a stado nie jest szczepione przeciw CSF

• Pobrać pełną krew od 30 świń z objawami klinicznymi (próbkowanie ukierunkowane) lub losowo (brak objawów klinicznych) i przetestować metodą PCR (można łączyć próbki, jeśli jest to dozwolone) i przebadać je indywidualnie za pomocą nieróżnicowego testu ELISA

Podejrzenie przewlekłego krążenia CSF u świń w każdym wieku bez śmiertelności, a stado jest szczepione przeciw CSF

• Pobrać pełną krew od 30 świń (nieszczepionych w ciągu ostatnich 2 tygodni) z objawami klinicznymi (ukierunkowane pobieranie próbek) lub losowo (brak objawów klinicznych) i przetestować metodą PCR (można łączyć próbki, jeśli jest to dozwolone) i przebadać indywidualnie nieróżnicowym testem ELISA i różnicowym testem E2 ELISA