Diagnostyka laboratoryjna: Mycoplasma hyopneumoniae

Dostępne testy:

Zmiany makroskopowe

• Kontrola wzrokowa zmian w płucach

• Zalety:
  • Łatwe do wykonania
  • Można ocenić późne infekcje u świń wysyłanych do uboju
• Wady:
  • Niediagnostyczny/patognomoniczny; wiele innych możliwych przyczyn
  • Wymaga innego potwierdzenia diagnostycznego

Hodowla bakteryjna

• Izolacja żywego organizmu z tkanek ze zmianami chorobowymi lub z popłuczyn oskrzelowych
• Typy próbek: płuca lub popłuczyny oskrzelowe
• Zalety:
  • Tradycyjny złoty standard
  • Świnie mogą mieć wynik dodatni przez 7-8 miesięcy (długi okres kolonizacji)
• Wady:
  • Wymagane specjalne podłoże (podłoże Friis)
  • Dostępna w niewielu laboratoriach
  • Droga
  • Bardzo trudny w hodowli (wiele fałszywie negatywnych wyników)

Immunohistochemia (IHC)

• Wykrywa obecność antygenu bakteryjnego
• Typy próbek: tkanka płuc
• Zalety:
  • Wykrywa bakterie w miejscu zmiany (dowód na bycie przyczyną zmiany)
  • Świnie mogą mieć wynik dodatni przez 7-8 miesięcy (długi okres kolonizacji)
• Wady:
  • Należy dostarczyć prawidłową próbkę tkanki – tkanka płuc musi zawierać przekrój dróg oddechowych (komórki nabłonka oskrzeli)
  • Wymaga obecności znacznie większej liczby bakterii niż PCR
  • Ocena tylko małej próbki tkanek

Przeciwciało fluorescencyjne (FA)

• Wykrywa obecność antygenu bakteryjnego
• Typy próbek: tkanka płuc
• Zalety:
  • Wykrywa bakterie w miejscu zmiany (dowód na bycie przyczyną zmiany)
  • Świnie mogą mieć wynik dodatni przez 7-8 miesięcy (długi okres kolonizacji)
• Wady:
  • Należy dostarczyć prawidłową próbkę tkanki – tkanka płuc musi zawierać przekrój dróg oddechowych (komórki nabłonka oskrzeli). Zobacz: ryc. 2 powyżej.
  • Wymaga obecności znacznie większej liczby bakterii niż PCR
  • Ocena tylko małej próbki tkanek

Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR)

• Wykrywa obecność określonej sekwencji bakteryjnego kwasu nukleinowego (DNA)
• Typy próbek: płuca, wymazy (nosowe, krtaniowe, tchawiczo-oskrzelowe lub oskrzelowe) lub popłuczyny z oskrzeli
• Zalety:
  • Bardzo wysoka czułość (może wykryć niewielkie ilości bakterii)
  • Można łączyć próbki aby zwiększyć czułość diagnostyczną podczas diagnostyki stada
  • Świnie mogą mieć wynik dodatni przez 7-8 miesięcy (długi okres kolonizacji)
  • Średni koszt
• Wady:
  • Nie jest dowodem na chorobę
  • Płyn ustny nie jest zbyt dobrą próbką (wiele wyników fałszywie ujemnych)

Tabela 1: Schematyczne zestawienie wyników badań naukowych i wyników terenowych dotyczących czułości różnych typów próbek w testach PCR na Mycoplasma hyopneumoniae.

	Względna czułość	Łączenie próbek*
Płyn ustny	-	Nie
Wymaz z nosa	+	Różnie
Wymaz krtaniowy	++	Korzystne
Wymaz tchawiczo-oskrzelowy	++	Korzystne
Wymaz oskrzelowy	+++	Korzystne
Popłuczyny z drzewa oskrz.	++	Nie
Tkanka płucna	++++	Tak

* Łączenie próbek może być korzystne dla zwiększenia wrażliwości diagnostycznej podczas diagnozowania stada; nie dla diagnozy indywidualnych zwierząt

Test immunoenzymatyczny (ELISA)

• Wykrywa obecność przeciwciał
• Rodzaje próbek: surowica
• Zalety:
  • ​​​​Może być stosowany w przypadkach przewlekłych.
  • Zwierzęta pozostają dodatnie przez wiele miesięcy.
• Wady:
  • Wykryte specyficzne przeciwciała i czas wykrycia mogą się znacznie różnić w różnych dostępnych na rynku zestawach
  • Nie można odróżnić przeciwciał matczynych od tych po ekspozycji na patogen
  • Poziomy przeciwciał nie korelują z ochroną
  • Szczepienie nie wywołuje serokonwersji (w dużym stopniu zależy od szczepionki i użytego testu)
  • Wiele zarażonych świń nie ulega serokonwersji
  • Przeciwciała nie zawsze są wykrywane przez cały czas trwania infekcji
  • Pewna reaktywność krzyżowa z innymi mykoplazmami, zwłaszcza M. flocculare, która jest niepatogenna i często występuje u świń

Interpretacja wyniku:

Zmiany makroskopowe:

• Dodatni: zmiany makroskopowe płuc mogą służyć jako jedna z możliwości diagnozy
• Ujemny: wczesne przypadki zwykle nie objawiają się rozległymi zmianami w płucach

Hodowla bakteryjna:

• Dodatni: potwierdzenie choroby
• Ujemny: ujemny, bakterie mogły zostać nie wyhodowane, jeśli badanie nastąpi zbyt późno po zakażeniu lub po leczeniu antybiotykami lub po prostu niezdolne do wzrostu z powodu przerostu innych bakterii (obecne, ale bardzo trudne do hodowli)

IHC

• Dodatni: bakterie obecne w miejscu zmian
• Ujemny: ujemny lub bakterie mogły zostać pominięte, jeśli badanie nastąpi zbyt późno po zakażeniu lub po leczeniu antybiotykami

FA

• Dodatni: bakterie obecne w miejscu zmian
• Ujemny: ujemny lub bakterie mogły zostać pominięte, jeśli badanie nastąpi zbyt późno po zakażeniu lub po leczeniu antybiotykami

PCR

• Dodatni: bakterie obecne, nie potwierdza jednak choroby
• Ujemny: ujemny lub bakterie mogły zostać pominięte, jeśli badanie nastąpi zbyt późno po zakażeniu lub po leczeniu antybiotykami

ELISA

• Dodatni: przeciwciała matczyne lub wcześniejsza ekspozycja (zwykle 3 do 8 tygodni po ekspozycji) na szczepionkę lub bakterie typu dzikiego
• Ujemny: ujemny lub infekcja nie stymulująca serokonwersji lub zbyt wczesna do wykrycia (zwykle trwa od 3 do 8 tygodni po ekspozycji)

Możliwe scenariusze

Tuczniki z przewlekłym kaszlem:

• Sekcja 1-3 niedawno padłych świń lub eutanazja świń kaszlących. Dogłębnie oceń płuca pod kątem zmian w części brzusznej doczaszkowej. Należy pobrać wiele kawałków płuc (upewniając się, że próbka zawiera drogi oddechowe) i umieścić w formalinie do oceny IHC lub FA.
• Odsetek płuc ze zmianami jest bezpośrednio związany z ekonomicznym wpływem choroby.

Potwierdzanie ujemności zwierząt remontowych pod kątem obecności Mycoplasma hyopneumoniae

• Należy upewnić się, że u zwierząt nie występuje kaszel
• Losowe pobranie do najmniej 30 surowic od zwierząt remontowych i zbadanie ELISA.

Monitorowanie zwierząt remontowych pod kątem siewstwa przed wprowadzeniem do stada hodowlanego z wynikiem dodatnim lub ujemnym

• Należy upewnić się, że u zwierząt nie występuje kaszel
• Pobrać co najmniej 30 losowych próbek - wymazów z krtani od zwierząt remontowych. Połączyć próbki w grupy po 5 lub 6 i zbadanie za pomocą PCR.