Esperienza Pratica: capacità di rilevamento dell'infezione da PRRS nei verri in funzione del tipo di campione

Una delle possibili vie di trasmissione del virus PRRS, e quella che genera il maggiore impatto, è l'ingresso di dosi di seme di verri infetti. Una delle chiavi per ridurre il rischio rappresentato da questa via di diffusione è un adeguato programma di monitoraggio presso il Centro di Inseminazione. La tecnica PCR viene generalmente utilizzata per determinare la presenza o l'assenza del virus nei campioni biologici prelevati dai verri, e probabilmente la scelta del tipo di campione da analizzare è uno dei punti critici che determinerà il successo del programma attuato presso il Centro .

Esistono diverse pubblicazioni scientifiche che indicano le seguenti particolarità nella dinamica dell'infezione e dell'escrezione del virus PRRS nei verri:

• La rilevazione nel sangue avviene generalmente prima della rilevazione nel seme.
• L'escrezione per via seminale è:
  • Irregolare: non tutti i verri affetti da viremia rilevano il virus nel liquido seminale
  • Intermittente: la fase di escrezione può durare mesi

Lo sperma, a causa delle sue caratteristiche, come la presenza di inibitori della PCR, può rendere difficile l'esecuzione della tecnica PCR.

In questo modo sembrerebbe che il prelievo ideale sarebbe l'estrazione del sangue, ma i prelievi di sangue convenzionali di routine e frequenti attraverso la vena femorale possono causare problemi al benessere dei verri a causa del rischio di flebiti nel punto di prelievo.

Per ridurre questo problema, esistono possibili alternative a questo tipo di campionamento come:

• Tampone nasale o orale,
• Puntura con ago di basso calibro e successivo prelievo di sangue con tampone senza terreno.

Per valutare l'efficacia dei possibili campioni e delle tecniche da introdurre in un programma di monitoraggio dei verri, la positività e la carica virale sono state determinate individualmente con la tecnica PCR, in un lotto di 30 verri provenienti da un allevamento che erano stati infettati dal virus della PRRS. dai seguenti campioni:

• Prelievo convenzionale del sangue con una provetta a vuoto mediante puntura nella vena femorale. (Foto 1)
• Tampone di sangue ottenuto mediante micropuntura nella vena auricolare e introduzione del tampone in 0,5 ml di soluzione salina sterile. (Foto 3)
• Sangue FTA® card ottenuto mediante micropuntura nella vena auricolare (Foto 4)
• Tampone orale o salivare
• Seme non diluito.

I risultati hanno determinato che:

• Il 93% dei verri erano positivi nel campione di sangue dall'estrazione convenzionale nella vena femorale.
• Il 90% dei verri sono risultati positivi nel tampone di sangue con micropuntura. Le cariche virali erano inferiori a quelle ottenute nella provetta di sangue e un verro era positivo nel prelievo di sangue convenzionale e negativo nel tampone di sangue.
• Il 25% dei campioni di seme risultarono positivi. I verri positivi allo sperma erano tutti viremici ed erano anche quelli con una carica virale nel sangue più elevata. Le cariche virali nello sperma erano inferiori rispetto alle cariche virali nel sangue degli stessi verri.
• Il 33% dei verri erano positivi al tampone orale. Le cariche virali dei positivi erano inferiori alle cariche virali nel sangue.
• Il 23% delle card FTA® è risultato positivo con carica virale bassa. Come avviene per i campioni di sperma, gli animali risultati positivi alle card FTA® erano quelli che presentavano cariche virali più elevate nei campioni di sangue ottenuti con il metodo convenzionale.

Conclusioni e prospettive future

• Per il rilevamento precoce della presenza del virus, un programma basato esclusivamente sul campionamento dello sperma può aumentare i tempi di rilevamento.
• Una bassa carica virale nei campioni di sperma può generare risultati PCR falsi negativi a seconda di fattori quali la diluizione del seme raccolto, l'omogeneità del campione prelevato, la capacità di rilevamento del kit PCR, il protocollo PCR utilizzato, ecc.
• Il tampone di sangue con micropuntura può essere una buona alternativa al prelievo di sangue convenzionale. Studi futuri potranno determinare come aumentare la capacità di rilevamento a seconda del tipo di tampone utilizzato per ottenere un maggiore assorbimento del sangue e a seconda della quantità di soluzione salina sterile in cui viene inserito il tampone per ridurre la diluizione.
• Le card FTA® non sembrano essere un buon tipo di campione secondo i risultati di questo studio, anche se il fatto che la positività venga rilevata quando la carica virale nel sangue è elevata incoraggia studi futuri focalizzati sul miglioramento del protocollo di campionamento ed estrazione della frazione di sangue dalle card.