Diagnosi di Laboratorio: Afta Epizootica nei Suini

Test disponibili:

Patologia macroscopica (Gross pathology)

• Identificazione di lesioni, in particolare vescicole nella zona del muso e delle zampe.
• Pro:
  • Facile identificazione macroscopica delle vescicole.
• Contro:
  • Clinicamente non si distingue dalle altre Malattie Vescicolari.
  • Di solito richiede un'altra conferma diagnostica.

Reazione a catena della polimerasi (PCR, Polymerase chain reaction)

• Rileva la presenza di una sequenza specifica di acido nucleico virale (RNA).
• Tipi di campioni: fluido vescicolare o epitelio (tipo di campione preferito), siero, campione esofageo-laringeo (quando non si dispone di vescicola o epitelio), latte.
• Pro:
  • Il metodo più sensibile e preferito per rilevare l'agente.
  • I campioni possono spesso essere raggruppati per ridurre i costi e minimizzare la perdita di sensibilità.
  • Può prendere di mira proteine ​​universali per il rilevamento generale o proteine ​​sierotipo-specifiche per la sierotipizzazione
• Contro:
  • Costo moderato.
  • Richiede primers adeguati, soprattutto se prende di mira proteine ​​strutturali sierotipo specifiche.

Elenco dei sierotipi attualmente noti per l'afta epizootica (non esiste protezione crociata tra sierotipi):

• Asia 1
• Sud Africa Tipo 1 (SAT 3)
• Sud Africa Tipo 1 (SAT 2)
• Sud Africa Tipo 1 (SAT 1)
• C
• A
• O

Antigen Enzyme-linked immunosorbent assay (Ag-ELISA)

• Rileva la presenza dell'antigene.
• Tipi di campioni: fluido vescicolare o epitelio (tipo di campione preferito), siero, campione esofageo-laringeo (quando vescicole o l'epitelio non sono disponibili), latte.
• Pro:
  • Metodo di scelta per la rilevazione e l'identificazione del sierotipo.
  • Può essere utilizzato nella diagnosi di un singolo animale o a livello di allevamento.
  • Può essere utilizzato per differenziare i sierotipi.
  • Qualsiasi risultato positivo per il virus di campo è considerato significativo.

Tabella 1. Diverse proteine ​​virali possono essere utilizzate per favorire gli obiettivi diagnostici.

Antigene bersaglio	Variabilità	Uso
Proteine ​​strutturali	Variabile	Sierotipizzazione
Proteine non ​​strutturali	Conservata	Rilevamento universale: non specifico per il sierotipo

• Contro:
  • La presenza dell'antigene virale può essere sierotipo-specifica.
  • Potrebbero essere necessari test multipli per identificare i sierotipi.

Antibody Enzyme-linked immunosorbent assay (Ab-ELISA)

• Rileva la presenza di anticorpi.
• Tipi di campioni: siero.
• Pro:
  • Gli anticorpi circolanti possono essere rilevati da 3 a 5 giorni dopo la comparsa dei segni clinici.
  • Gli animali rimangono positivi per diversi mesi.
  • Può essere utilizzato nei casi più vecchi.
  • Può essere utilizzato per differenziare l'esposizione al virus di campo da alcuni vaccini morti/ricombinanti (che prendono di mira specifiche proteine ​​non strutturali).
  • Qualsiasi risultato positivo per il virus di campo è considerato significativo.
• Contro:
  • La risposta anticorpale è sierotipo-specifica.
  • Alcuni animali possono rimanere sieropositivi per diversi anni.
  • La forza della risposta immunitaria può variare con la virulenza del ceppo.
  • La presenza di anticorpi non è sempre correlata alla protezione.

Lateral flow devices (LFD)

• Rileva la presenza dell'antigene.
• Tipi di campioni: fluido vescicolare o epitelio.
• Pro:
  • Metodo di scelta per la rilevazione e l'identificazione del sierotipo.
  • Può essere utilizzato nella diagnosi di un singolo animale o a livello di allevamento.
  • Può essere utilizzato per differenziare i sierotipi.
  • Qualsiasi risultato positivo per il virus di campo è considerato significativo.
• Contro:
  • La presenza dell'antigene virale può essere sierotipo-specifico.
  • Meno sensibile dell'Ag-ELISA
  • Potrebbero essere necessari test multipli per identificare i sierotipi.

Virus isolation (VI)

• Isola il virus vivo.
• Tipi di campioni: fluido vescicolare o epitelio (tipo di campione preferito), siero, campione esofageo-laringeo (quando la vescicola o l'epitelio non sono disponibili), latte.
• Pro:
  • Criterio di riferimento.
  • Isolamento del virus da utilizzare nello sviluppo di vaccini (vaccini stabulogeni/autogenous vaccines) o test sierologici (ELISA) per determinare il sierotipo.
• Contro:
  • Caro.
  • Risultati lenti.
  • Richiede linee cellulari speciali; cellule tiroidee di bovino (vitello) o cellule renali di suino, vitello o agnello.
  • Il processo di inoculazione è molto laborioso.
  • Spesso difficile da coltivare (molti falsi negativi).

Sequenziamento genetico (Genetic sequencing)

• Sequenza di segmenti genetici dell'acido nucleico (RNA) del virus.
• Tipi di campioni: fluido vescicolare o epitelio (tipo di campione preferito), siero, campione esofageo-laringeo (quando la vescicola o l'epitelio non sono disponibili), latte.
• Pro:
  • Può aiutare con l'epidemiologia molecolare.
  • Aiuta a identificare il sierotipo.
• Contro:
  • Caro.
  • Risultati lenti.

Interpretazione dei risultati:

Lesioni macroscopiche (vescicole)

• Positivo: Dovrebbe essere indagato come possibile afta epizootica.
• Negativo: negativo o non rilevato se il test viene eseguito molto tempo dopo l'infezione o se l'infezione proviene da un ceppo lieve.

PCR

• Positivo: Il virus è presente.
• Negativo: negativo oppure il virus non viene rilevato se il test viene eseguito molto tempo dopo l'infezione.

Antigen Enzyme-linked immunosorbent assay Ag-ELISA

• Positivo: Il virus è presente.
• Negativo: negativo, il virus non viene rilevato se il test viene eseguito troppo tempo dopo l'infezione o se è stato testato il sierotipo sbagliato.

Antibody Enzyme-linked immunosorbent assay Ab-ELISA

• Positivo: anticorpi materni o precedente esposizione (>2-3 giorni) a virus di campo o ad alcuni vaccini.
• Negativo: negativo o esposizione al vaccino o al virus di campo troppo recente per essere rilevato o è stato testato per anticorpi del sierotipo sbagliato.

Lateral flow devices (LFD)

• Positivo: Il virus è presente.
• Negativo: negativo, il virus non viene rilevato se il test viene eseguito troppo tempo dopo l'infezione o se è stato testato il sierotipo sbagliato.

Virus Isolation (VI)

• Positivo: Il virus è presente.
• Negativo: negativo, il virus non viene rilevato se il test viene eseguito troppo tempo dopo l'infezione o se è stata utilizzata la linea cellulare sbagliata.

Genetic Sequencing

• Positivo: Il virus è presente.
• Negativo: negativo, il virus non viene rilevato se il test viene eseguito troppo tempo dopo l'infezione o se è presente troppo poco virus per il sequenziamento.

Scenari

È importante notare che in alcuni paesi potrebbe essere richiesta l'approvazione delle autorità competenti prima di poter effettuare qualsiasi test sull'afta epizootica.

Sospetto focolaio acuto di afta epizootica nei suini di qualsiasi età e l'allevamento non è vaccinato contro l'afta epizootica

• Raccogliere il liquido vescicolare da diversi animali affetti e analizzarlo mediante Ag-ELISA o PCR; il raggruppamento dei campioni può essere preso in considerazione per la PCR.

Sospetta epidemia acuta di afta epizootica nei suini di qualsiasi età e l'allevamento è vaccinato contro l'afta epizootica

• Raccogliere il liquido vescicolare da diversi animali affetti e analizzarlo mediante Ag-ELISA o PCR; il raggruppamento dei campioni può essere preso in considerazione per la PCR.
• Raccogliere il siero di diversi animali affetti che hanno mostrato segni clinici per almeno 3 giorni e analizzarli individualmente mediante Ab-ELISA; mirare ad una proteina non strutturale che non è presente nel vaccino.

Sospetta circolazione dell'afta epizootica in suini di qualsiasi età senza segni clinici e l'allevamento non è vaccinato contro l'afta epizootica

• Raccogliere il siero da 30 suini campionati casualmente e analizzarli individualmente mediante Ab-ELISA; proteina strutturale bersaglio.

Sospetta circolazione dell'afta epizootica nei suini di qualsiasi età senza segni clinici e l'allevamento è vaccinato contro l'afta epizootica

• Raccogliere il siero da 30 suini campionati casualmente e analizzarli individualmente mediante Ab-ELISA; mirare ad una proteina non strutturale che non è presente nel vaccino.