Diagnosi di Laboratorio: Actinobacillus pleuropneumoniae (APP)

Test disponibili:

Patologia macroscopica (Gross pathology)

• Si valuta la presenza di lesioni tissutali che possono essere quasi diagnostiche della malattia.
• Sede delle lesioni: polmone.
• Aree di consolidamento necroemorragico nel polmone accompagnate da pleurite fibrinosa (figura 1).

• Pro:
  • La diagnosi presuntiva può essere fatta dopo un esame macroscopico dei polmoni.
• Contro:
  • Actinobacillus suis può causare lesioni simili ma meno gravi.
  • Non identifica il sierotipo.

Coltura batterica (Bacterial culture)

• Isolamento degli organismi vivi.
• Tipi di campioni: polmone.
• Pro:
  • Può essere eseguito in qualsiasi laboratorio (anche interno).
  • Il biotipo I richiede NAD (normalmente fornito da una colonia in coltura di Staphylococcus aureus).
  • Il biotipo II non richiede NAD.
  • Costo relativamente basso.
• Contro:
  • Non sempre facile da coltivare.
  • Non identifica il sierotipo.
  • Se i suini sono stati precedentemente trattati con antibiotici, ciò potrebbe impedire la crescita batterica.

Sensibilità antimicrobica (antibiogramma) (Antimicrobial susceptibility)

• Test in vitro: capacità di un organismo vivente di crescere in concentrazioni specifiche di diversi antimicrobici.
• Tipi di campioni: polmone.
• Pro:
  • Identificazione della sensibilità o della resistenza di ceppi specifici ai comuni antimicrobici.
  • Identificazione dei trend di resistenza antimicrobica.
• Contro:
  • Richiede un isolato batterico.
  • I test in vitro possono differire leggermente dai risultati in vivo.
  • Alcuni antimicrobici specifici potrebbero non essere inclusi o potrebbero richiedere test speciali separati.
  • Costo moderato.

Reazione a Catena della Polimerasi (PCR) Generale o Sierotipizzazione (Polymerase chain reaction (PCR) General or Serotyping)

• Rileva la presenza di sequenze specifiche di acido nucleico batterico (DNA).
• Tipi di campioni: polmone e tonsille.
• Pro:
  • Alta sensibilità.
  • Generale
    • Prende di mira i geni della tossina ApxIV.
    • Presente in tutti i sierotipi di APP.
  • Sierotipizzazione
    • Prende di mira diverse parti dei geni delle tossine ApxI, ApxII e ApxIII.
    • Vedere la Tabella 1 per la sierotipizzazione e la produzione di tossine..
  • Costo moderato.
    • I campioni di tessuto possono spesso essere combinati per ridurre i costi e minimizzare la perdita di sensibilità.
• Contro:
  • Richiede diversi primer specifici per determinare il sierotipo.
  • Non tutti i ceppi possono essere tipizzati.
    • Attualmente sono identificati 19 sierotipi e questo numero continuerà ad aumentare.
  • Non tutti i test sono convalidati per analizzare i campioni di tonsille.

Tabella 1: Produzione di tossine per ciascun sierotipo.

	Produzione di tossine
Sierotipo	ApxI	ApxII	ApxIII	ApxIV
1	X	X		X
2		X	X	X
3		X	X	X
4		X	X	X
5	X	X		X
6		X	X	X
7		X		X
8		X	X	X
9	X	X		X
10	X			X
11	X	X		X
12		X		X
13		X		X
14	X			X
15		X	X	X
16	X	X		X
17		X		X
18		X		X
19		X		X

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) LPS-O-Antigen

• Rileva la presenza di anticorpi.
• Tipi di campioni: siero.
• Obiettivo: Antigene LPS-O.
• Pro:
  • Può essere utile per assistere nella sierotipizzazione.
  • Alta sensibilità.
• Contro:
  • Elevata quantità di reattività crociata tra sierotipi dovuta alla condivisione di epitopi dell'antigene capsulare e LPS-O.
    • I seguenti sierotipi reagiscono in modo crociato perché condividono gli antigeni LPS-O:
      • Reazione crociata tra i sierotipi 1, 9 e 11.
      • Reazione crociata tra i sierotipi 3, 6, 8, 15, 17 e 19.
      • Reazione crociata tra i sierotipi 4, 7 e 18.
  • Non determina il sierotipo specifico con un singolo test.
  • Molto costoso e poco pratico testare tutti i sierotipi.

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) ApxIV antigen

• Rileva la presenza di anticorpi.
• Tipi di campioni: siero.
• Obiettivo: Antigene ApxIV.
• Pro:
  • Alta sensibilità.
  • Rileva tutti i sierotipi di APP.
• Contro:
  • Non determina il sierotipo specifico.
  • Non determina la virulenza dei ceppi.

Interpretazione dei risultati:

Patologia macroscopica (Gross pathology)

• Positivo: La diagnosi presuntiva è spesso sufficiente.
• Negativo: Nessuna lesione polmonare macroscopica.

Coltura batterica (Bacterial culture)

• Positivo:
  • Biotipo 1: Dipendente dal NAD.
  • Biotipo 2: Indipendente dal NAD.
• Negativo: Negativo o animale eventualmente precedentemente trattato con antibiotici.

Sensibilità antimicrobica (antibiogramma) (Antimicrobial susceptibility)

• Sensibile: possibile buona scelta per il trattamento se l'antimicrobico può raggiungere il tessuto bersaglio.
• Resistente: è necessario selezionare un antimicrobico diverso.
• MIC:Se viene eseguita la MIC (concentrazione minima inibente), è necessario assicurarsi che l'antimicrobico selezionato raggiunga il valore MIC indicato nell'organo bersaglio.

PCR

• Positivo:
  • Organismo presente.
  • Può identificare la presenza di diversi geni che aiutano la sierotipizzazione.
• Negativo:
  • Infezione negativa o troppo vecchia.
  • Animale possibilmente precedentemente trattato con antibiotici.
  • Non tutti i ceppi possono essere sierotipizzati (non tipizzabili).

ELISA Antigene LPS-O

• Positivo: aiuta a determinare il sierotipo o identificare un gruppo di sierotipi.
• Negativo: negativo, infezione troppo vecchia o animale eventualmente precedentemente trattato con antibiotici.

ELISA Antigene ApxIV

• Positivo: Organismo presente.
• Negativo: negativo, infezione troppo vecchia o animale eventualmente precedentemente trattato con antibiotici.

Scenari:

Suini da ingrasso con morte improvvisa o malattia respiratoria (acuta).

• Necroscopia di 1-3 suini recentemente morti o suini sottoposti a eutanasia con tosse. Valutare macroscopicamente i polmoni per aree di consolidamento necro-emorragico accompagnato da pleurite fibrinosa.
• Inviare i polmoni colpiti per la coltura batterica e il test PCR generale per APP e, se positivo, eseguire la PCR per la sierotipizzazione.

Stabilire lo status negativo dell'allevamento (Establish negative status of herd)

• Campiona 30 dei suini da ingrasso più grandi dell'allevamento e testali 2-3 volte l'anno utilizzando ApxIV ELISA.