Diagnosi di Laboratorio: Diarrea Epidemica Suina (PED)

Test disponibili:

Polymerase chain reaction (PCR)

• Rileva la presenza di una sequenza specifica di acido nucleico virale (RNA).
• Tipi di campioni: tessuti intestinali, feci, tamponi rettali, fluidi orali, ecc.
• Pro:
  • Sensibilità molto elevata (può rilevare piccole quantità di virus).
  • Rilevazione precoce: i casi acuti dovrebbero essere positivi.
  • Possono essere utilizzati molti tipi diversi di campioni (tessuti intestinali, feci, tamponi rettali, fluidi orali, ecc.).
  • Costo moderato:
    • Spesso è possibile combinare 10 campioni di feci/tamponi o tessuto intestinale per ridurre i costi e minimizzare la perdita di sensibilità.
    • I campioni di fluido orale solitamente non vengono raggruppati perché il valore Ct (numero di cicli necessari per amplificare l'RNA virale a un livello rilevabile) sarà più elevato (perché le concentrazioni del virus sono inferiori), il che può portare a una significativa perdita di sensibilità.
• Contro:
  • Il sequenziamento è necessario per differenziare il virus vaccinale dall'infezione da virus di campo.
  • La contaminazione ambientale può generare molti risultati positivi: i suini infetti diffondono grandi quantità di virus.

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)

• Rileva la presenza di anticorpi.
• Tipi di campioni: siero, fluidi orali.
• Pro:
  • Gli animali rimangono positivi per diverse settimane, soprattutto per le IgA nei fluidi orali.
  • Può essere utilizzato nei casi cronici.
• Contro:
  • Potrebbero esserci differenze nel rilevamento tra i diversi test.
  • Sono necessari dai 7 ai 14 giorni affinché gli animali diventino sieropositivi..
  • Non distingue tra anticorpi materni e anticorpi da esposizione.
  • Non distingue tra vaccinazione e infezione da virus di campo.
  • È meglio avere un ELISA che rilevi i livelli di IgA, soprattutto nei fluidi orali.

Immunohistochemistry (IHC)

• Rileva la presenza dell'antigene virale.
• Tipi di campioni: tessuti intestinali.
• Pro:
  • Rileva il virus nel punto della lesione (buona prova di causalità).
  • Consente di distinguere tra quantità basse, moderate ed elevate di virus presenti.

• Contro:
  • È necessario inviare il campione di tessuto corretto.
  • Richiede una quantità di virus significativamente maggiore rispetto alla PCR.
  • Valuta solo una piccola quantità di tessuto.
  • Nei suinetti i villi intestinali vengono distrutti rapidamente, determinando cambiamenti drammatici nella quantità di virus presente (colorazione) in soli 2 giorni.

Indirect fluorescent antibody (IFA)

• Rileva la presenza di anticorpi.
• Tipi di campioni: siero.
• Pro:
  • Alta sensibilità per il rilevamento.
• Contro:
  • Non fattibile per un gran numero di campioni.
  • I risultati dipendono dall’isolato virale utilizzato nel test.
  • L'affidabilità dipende in gran parte dall'abilità dei tecnici e varia in modo significativo tra i laboratori.

Interpretazione dei risultati:

PCR

• Positivo: Il virus è presente. Una recente vaccinazione con un virus vivo modificato può dare risultati PCR positivi. Grandi quantità di virus vengono eliminate dopo l'infezione (valori Ct molto bassi; cifra singola), soprattutto nei suini giovani. L'eliminazione e la contaminazione ambientale possono verificarsi in un lungo periodo di tempo.

Tabella 1. I suini infetti eliminano grandi quantità di virus nelle feci (valori Ct a una cifra nella PCR) con conseguente estesa contaminazione ambientale.

Ct PCR della PED rispetto al numero di copie genomiche
42	1
39	10
36	100
32	1.000
29	10.000
26	100.000
22	1.000.000
19	10.000.000
16	100.000.000
12	1.000.000.000
9	10.000.000.000
6	100.000.000.000

• Negativo: Negativo o il virus non viene rilevato se il test viene eseguito molto tempo dopo l'infezione.

ELISA

• Positivo: anticorpi materni o precedente esposizione (di solito > 7-14 giorni) al vaccino o al virus di campo.
• Negativo: negativo, infezione troppo recente per essere rilevata (di solito dovrebbe essere avvenuta almeno 7-14 giorni dopo l'esposizione) o è trascorso troppo tempo dopo l'infezione (soprattutto se si misurano le IgG sieriche).

IHC

• Positivo: Il virus è presente nel luogo della lesione.
• Negativo: Negativo o infezione troppo vecchia per rilevare il virus.

IFA

• Positivo: Anticorpi materni o precedente esposizione (di solito > 7-14 giorni) al vaccino o al virus di campo.
• Negativo: Negativo al vaccino o al virus di campo o infezione troppo recente per essere rilevata (normalmente dovrebbe essere almeno 7-14 giorni dopo l'esposizione).

Scenari

Diarrea nei suinetti con mortalità molto elevata in sala parto

• Raccogliere gli intestini da 2-5 suinetti per l'istologia e i test IHC.
• Raccogliere gli intestini o il contenuto fecale/tamponi da 5 suinetti e analizzarli come 1 pool mediante PCR.

Scrofette con diarrea +/- vomito

• Raccogliere i fluidi orali da 2 a 4 box diversi e analizzarli individualmente mediante PCR. Non raggruppare i campioni per i test.
• Raccogliere 10-15 tamponi rettali da scrofe con segni clinici o prelevare campioni casuali e analizzarli mediante PCR. I pool possono essere realizzati in gruppi di 5 per la PCR.

Testare le scrofette isolate dopo l'esposizione al virus PED vivo prima dell'introduzione nell'allevamento

• Il test non è raccomandato poiché la contaminazione ambientale sarà elevata e le scrofette risulteranno positive nelle feci o nei fluidi orali per diverse settimane, anche dopo che hanno smesso di diffondere il virus ed è sicuro introdurle nell'allevamento.

Suini da ingrasso con diarrea acuta post-svezzamento

• Raccogliere i fluidi orali da 2 a 4 box diversi e analizzarli individualmente mediante PCR. Non raggruppare i campioni per i test.
• Raccogliere 10-15 tamponi rettali da scrofe con segni clinici o prelevare campioni casuali e analizzarli mediante PCR. I pool possono essere realizzati in gruppi di 5 per la PCR.