Diagnosi di Laboratorio: Dissenteria Suina (Brachyspira hyodysenteriae)

Test disponibili:

Coltura batterica

• Isolamento di organismi vivi.
• Tipo di campione: feci.
• Pro:
  • Relativamente a buon mercato.
  • La presenza di Brachyspira spp. fortemente beta-emolitica è associata alla virulenza.

Tabella 1: Relazione tra la beta-emolisi in Brachyspira spp. e la malattia.

Brachyspira spp.	Beta-emolisi	Malattia
B. hyodysenteriae	Forte	Lesioni della Dissenteria Suina
B. hampsonii	Forte	Lesioni della Dissenteria Suina
B. suanatina	Forte	Lesioni della Dissenteria Suina
B. pilosicoli	Debole	Coliti da spirochete
B. murdochii	Debole	Coliti da spirochete
B. intermedia	Debole	Coliti da spirochete
B. innocens	Debole	Non patogena

• Contro:
  • Meno sensibile del test PCR.
  • Crescita lenta (fino a 10 giorni).
  • Richiede coltura anaerobica.
  • Alcuni ceppi meno virulenti possono essere trovati negli allevamenti senza segni clinici o lesioni.

Suscettibilità antimicrobica

• Test in vitro: capacità di un organismo vivente di crescere sotto specifiche concentrazioni di diversi antimicrobici.
• Tipo di campione: feci.
• Pro:
  • Identificazione della suscettibilità o resistenza di ceppi specifici ai comuni antimicrobici.
• Contro:
  • Richiede un isolato batterico.
  • I test in vitro possono differire leggermente dai risultati in vivo.
  • Alcuni antimicrobici specifici potrebbero non essere inclusi o potrebbero richiedere test speciali separati.
  • Costo moderato.
  • I risultati richiedono 7 giorni.

Istopatologia

• Valuta la presenza di lesioni tissutali che possono confermare la presenza di malattia.
• Tipo di campione: tessuti.
• Pro:
  • Le lesioni istopatologiche possono essere altamente suggestive se si trovano molte spirochete vicino alle lesioni intestinali..
  • Può rilevare forme lievi della malattia.
  Contro:
  • I tessuti intestinali di un animale morto di recente devono essere fissati in formalina.
  • Le lesioni sono simili ad altre malattie.

Impression smear

• Rileva la presenza di batteri.
• Tipi di campioni: tessuto dell'intestino crasso, feci.
• Pro:
  • Facile da eseguire.
    • Colorazione non specifica.
    • Microscopia in campo oscuro.
  • Una diagnosi presuntiva può essere fatta rilevando un gran numero di spirochete.
  • È possibile identificare un numero basso, moderato o elevato di batteri presenti.
• Contro:
  • Richiede la presenza di un numero significativamente maggiore di batteri rispetto alla coltura o alla PCR.
  • Non valuta la capacità emolitica degli isolati e quindi non distingue tra ceppi non patogeni, colite da spirochete e dissenteria suina.

Polymerase chain reaction (PCR)

• Rileva la presenza di una specifica sequenza di acido nucleico batterico (DNA).
• Tipi di campioni: tessuto intestinale, tamponi fecali, feci.
• Pro:
  • Alta sensibilità.
  • La quantificazione mediante PCR è associata alla presenza di lesioni.
  • Costo moderato.
    • I campioni di feci o di tessuto possono spesso essere raggruppati per ridurre i costi e minimizzare la perdita di sensibilità (soprattutto per quanto riguarda la rilevanza clinica).
• Contro:
  • Alta sensibilità: conferma la presenza di batteri ma non della malattia.
  • Sono necessari primers adeguati per rilevare e differenziare tra Brachyspira spp.

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)

• Rileva la presenza di anticorpi.
• Tipo di campione: siero.
• Pro:
  • Può rilevare l'infezione a livello di allevamento.
  • Gli anticorpi possono durare per diversi mesi.
  • I livelli sierici di IgG sono correlati alla durata dei segni clinici.
• Contro:
  • I kit non sono facilmente disponibili.
  • Bassa sensibilità e specificità.
    • Sono utilizzati per il rilevamento a livello di allevamento e non per la diagnosi dei singoli animali.
  • Gli anticorpi specifici e il tempo di rilevamento possono variare leggermente tra i diversi kit commerciali disponibili.
  • Spesso, gli antigeni utilizzati possono essere specifici per particolari specie di Brachyspira.
  • Non c'è correlazione tra i livelli di anticorpi e la protezione.
  • Non è conosciuta la protezione crociata tra Brachyspira spp.

Interpretazione dei risultati:

Coltura batterica

• Positivo: batterio presente.
  • Beta-emolisi forte – Dissenteria Suina.
  • Beta-emolisi debole – colite da spirochete o non patogena.
• Negativo: Negativo, animale eventualmente precedentemente trattato con antibiotici o troppo tardi nell'infezione.

Suscettibilità antimicrobica

• Sensibile: possibile buona scelta per il trattamento se l'antimicrobico può raggiungere il tessuto bersaglio.
• Resistente: selezionare un antimicrobico diverso.
• MIC: Se viene eseguita la MIC (concentrazione minima inibente), è necessario assicurarsi che l'antimicrobico selezionato raggiunga il valore MIC indicato nell'organo bersaglio.

Istopatologia

• Positivo: Le spirochete trovate vicino alle lesioni sono una diagnosi presuntiva.
• Negativo: nessuna lesione intestinale.

Impression smear

• Quantità di spirochete presenti:
  • Alta: altamente indicativo di malattia.
  • Moderata: interpretazione variabile.
  • Bassa: valore discutibile (potrebbe essere una condizione non patogena o cronica)
  • Non presente: animale eventualmente precedentemente trattato con antibiotici o contribuente non significativo.

PCR

• Positivo: conferma la presenza del batterio.
• Negativo: Negativo o infezione troppo vecchia per rilevare il batterio o l'animale precedentemente trattato con antibiotici.

ELISA

• Positivo: Precedenti esposizioni (>2-4 settimane) a vaccini o batteri di campo.
• Negativo:
  • Negativo al vaccino o ai batteri di campo.
  • Infezione troppo vecchia per essere rilevata.
  • L'uso di antibiotici può inibire la crescita batterica e diminuire la risposta immunitaria.

Scenari:

Suini da ingrasso con diarrea (acuta)

• Raccogliere campioni fecali da 10 o più suini con diarrea non trattati con antibiotici e inviarli per coltura batterica e PCR in pool di 5.
• Autopsia di 1-3 suini recentemente morti o soppressione di suini con diarrea. Valutare macroscopicamente l'intestino crasso (in particolare il cieco e il colon a spirale) e fissarlo in formalina per l'istopatologia.

Storia cronica di diagnosi di dissenteria suina ma senza segni clinici osservati

• Raccogli campioni di feci da 4-6 box e invia per la PCR.
• Raccogliere campioni da 15-20 suini a 14 e 18 settimane di età.
  • Due approcci alla raccolta:
    • Trasversale: raccogliere contemporaneamente da diversi gruppi di età (si ottengono risultati più velocemente).
    • Longitudinale – raccogliere dagli stessi suini nel tempo (si ottengono risultati più accurati).
  • Analisi di campioni di siero mediante ELISA.