Diagnosi di laboratorio: Peste suina classica (PSC)

Test disponibili

Reazione a catena della polimerasi (PCR Polymerase Chain Reaction)

• Rileva la presenza di specifiche sequenze di acido nucleico virale (RNA).
• Tipi di campioni: siero o tessuti.
• Pro:
  • Metodo più sensibile e preferito per rilevare l'agente.
  • I campioni possono spesso essere raggruppati in pool per ridurre i costi e ridurre al minimo la perdita di sensibilità.
• Contro:
  • Costo moderato.
  • Richiede primers adeguati.

Anticorpi fluorescenti (FAT Fluorescent Antibody Test )

• Rileva la presenza di virus.
• Tipi di campioni: tessuti, in particolare tonsille.
• Pro:
  • Buona sensibilità.
• Contro:
  • Non distingue tra vaccinazione e infezione da virus di campo.
    • I vaccini vivi modificati possono dare un FAT positivo per circa 2 settimane..
  • Non fattibile per un gran numero di campioni.
  • I risultati dipendono dal ceppo virale utilizzato nel test.
  • L'affidabilità dipende molto dall'abilità dei tecnici.

Immunoperossidasi differenziale mediante anticorpi monoclonali (MAbs)

• Rileva la presenza dell'agente.
• Tipi di campioni: tonsille o altri organi FAT-positivi.
• Utilizza una serie di tre diversi anticorpi monoclonali (MAb) per distinguere tra vaccinazione, infezione da virus di campo e altri Pestivirus.
• Pro:
  • Consente di distinguere tra vaccinazione, infezione da virus di campo e altri Pestivirus.
• Contro:
  • Costo medio-alto.
  • Richiede un campione di tessuto FAT positivo.
  • I risultati dipendono dai tre diversi MAb e da un anticorpo policlonale (PAbs) utilizzati nel test.
    • MAbs che riconoscono tutti i ceppi virali della PSC.
    • MAbs che riconosce tutti i ceppi vaccinali per la PSC usata in questo paese.
    • MAbs che riconosce virus della diarrea bovina (BVD) e della malattia della frontiera o di Border (BD).
    • PAbs che riconosce la PSC.
  • Non fattibile per un gran numero di campioni.
  • L'affidabilità dipende molto dall'abilità dei tecnici.

Saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)

• Rileva la presenza di anticorpi.
• Tipi di campioni: siero.
• Pro:
  • Gli animali rimangono positivi per diverse settimane.
  • Può essere utilizzato nei casi cronici.
  • Può essere utilizzato per differenziare l'esposizione al virus di campo dal vaccino con geni deleti.
  • Qualsiasi risultato positivo per il virus di campo è considerato significativo.
• Contro:
  • Se possibile, il test appropriato deve essere abbinato alla delezione genica appropriata nel vaccino (di solito E2).
  • Gli animali impiegano almeno 21 giorni per diventare sieropositivi.
  • Può verificarsi reattività crociata con altri Pestivirus.

Neutralizzazione virale (VN Virus neutralization)

• Rileva la presenza di anticorpi.
• Tipi di campioni: siero.
• Pro:
  • Gli animali rimangono positivi per diverse settimane.
  • Può essere utilizzato nei casi cronici.
  • Sensibilità maggiore rispetto ad ELISA (può rilevare una concentrazione inferiore di anticorpi).
• Contro:
  • Non fattibile per un gran numero di campioni.
  • Gli animali impiegano almeno 21 giorni per diventare sieropositivi.
  • Non distingue tra vaccinazione e infezione da virus di campo.
  • L'affidabilità dipende molto dall'abilità dei tecnici.
  • La reattività dipende dal ceppo virale utilizzato.
  • Può verificarsi reattività crociata con altri Pestivirus.

Interpretazione dei risultati:

PCR

• Positivo: è presente un virus di campo o un ceppo vaccinale.
• Negativo: Negativo o il virus non viene rilevato se il test viene eseguito molto tempo dopo l'infezione.

FAT

• Positivo: È presente virus di campo o ceppo vaccinale.
• Negativo: Negativo o il virus non viene rilevato se il test viene eseguito molto tempo dopo l'infezione.

Immunoperossidasi con MAbs

• Positivo: Vedere tabella 1.
• Negativo: Negativo o il virus non viene rilevato se il test viene eseguito molto tempo dopo l'infezione.

Tabella 1. Interpretazione dei risultati del test dell'immunoperossidasi differenziale con anticorpi monoclonali (MAbs). Fonte: OIE.

Anticorpo policlonale	Anticorpo monoclonale specífico per			Interpretazione
	Ceppo PSC	Ceppo vaccinale PSC	Ceppo BVD/BD
+	+	—	—	ceppo di campo della PSC
+	+	+	—	ceppo vaccinale della PSC
+	—	—	+	ceppo di BVD/BV
+	—	—	—	Altri virus no PSC Pestivirus*

* Sempre si deve tenere in considerazione dell'esistenza di nuovi ceppi di PSC e qualsiasi ceppo isolato di casi sospetti di PSC devono essere inviati ad un Laboratorio di referenza dell'OIE.

ELISA

• Positivo: anticorpi materni o precedente esposizione (>21 giorni) al vaccino o al virus di campo.
• Negativo: negativo o esposizione al vaccino o al virus di campo troppo recente per essere rilevata.

La tabella 2 aiuta a dimostrare le capacità DIVA (differenziazione degli animali infetti dagli animali vaccinati) di alcuni test ELISA quando viene utilizzato un vaccino con geni deleti.

ELISA non differenziale	Risultato ELISA-E2	Interpretazione
Positivo	Positivo	Animale esposto a virus di campo
Positivo	Negativo	Animale vaccinato non esposto a virus di campo
Negativo	Positivo	Errore del test, questo risultato non possibile
Negativo	Negativo	Animale non vaccinato e non esposto a virus di campo

VN

• Positivo: Anticorpi materni o precedente esposizione (>21 giorni) al vaccino o al virus di campo.
• Negativo: Negativo o esposizione al vaccino o al virus di campo troppo recente per essere rilevata.

Scenari

È importante notare che alcuni paesi potrebbero richiedere l'approvazione dell'autorità competente prima di poter eseguire qualsiasi test della PSC.

Sospetto di focolaio acuto di PSC in suini di qualsiasi età e allevamenti non vaccinati contro la PSC.

• Raccogliere il sangue da vari animali colpiti e analizzarlo mediante PCR; può essere preso in considerazione il raggruppamento di campioni.
• Raccogliere milze e tonsille da suini morti e analizzarle mediante PCR; può essere preso in considerazione il raggruppamento di campioni.

Sospetto di focolaio acuto di PSC in suini di qualsiasi età e allevamenti vaccinati contro la PSC.

• Raccogliere sangue da diversi animali colpiti che non sono stati vaccinati contro la PSC nelle ultime 2 settimane e analizzarlo mediante PCR; può essere preso in considerazione il raggruppamento di campioni.
• Raccogliere milze e tonsille di suini morti e analizzarli mediante PCR; può essere preso in considerazione il raggruppamento di campioni.
  • Se la PCR è positiva, testare il campione di tessuto utilizzando FAT e immunoperossidasi con MAbs.

Sospetto di circolazione cronica di PSC in suini di qualsiasi età senza mortalità ed allevamenti non vaccinati contro la PSC

• Raccogliere sangue da 30 suini con segni clinici (campionamento mirato) o selezionati casualmente (nessun segno clinico) e analizzare mediante PCR (può essere considerato il pooling) e individualmente mediante ELISA non differenziale.

Sospetto di circolazione cronica di PSC in suini di qualsiasi età senza mortalità ed allevamenti vaccinati contro la PSC

• Prelevare il sangue di 30 suini (non vaccinati nelle ultime 2 settimane) con segni clinici (campionamento mirato) o selezionati casualmente (nessun segno clinico) e analizzarli mediante PCR (può essere considerato il pooling) e individualmente mediante ELISA non differenziale ed ELISA differenziale E2.