Diagnosi di laboratorio: Mycoplasma hyopneumoniae nei suini

Test disponiblili:

Patologia macroscopica

• Ispezione visiva delle lesioni polmonari.

• Pro:
  • Facile da fare.
  • È possibile valutare le infezioni tardive nei suini inviati al macello.
• Contro:
  • Non diagnostico/patognomonico; molte altre possibili cause.
  • Richiede un'altra conferma diagnostica.

Coltura batterica

• Isolamento di organismi viventi da tessuti con lesioni o lavaggio bronco-alveolare.
• Tipi di campioni: polmonare o lavaggio bronco-alveolare
• Pro:
  • Criterio di riferimento.
  • I suini possono risultare positivi per 7-8 mesi (lungo periodo di colonizzazione).
• Contro:
  • Richiede un terreno di coltura speciale (terreno Friis).
  • Disponibile solo in pochissimi laboratori.
  • Caro.
  • Molto difficile da coltivare (molti falsi negativi).

Immunoistochimica (IHC)

• Rileva la presenza di antigene batterico.
• Tipo di campione: tessuto polmonare.
• Pro:
  • Rileva i batteri nel sito della lesione (buona prova di causalità).
  • I suini possono risultare positivi per 7-8 mesi (lungo periodo di colonizzazione).
• Contro:
  • È necessario inviare il campione di tessuto corretto: il tessuto polmonare deve contenere una sezione trasversale delle vie aeree (cellule epiteliali bronchiali).
  • Richiede un numero significativamente maggiore di batteri rispetto alla PCR.
  • Valuta solo una piccola quantità di tessuto.

Anticorpi fluorescenti (FA)

• Rileva la presenza di antigene batterico.
• Tipo di campione: tessuto polmonare.
• Pro:
  • Rileva il virus nel sito della lesione (buona evidenza di causalità).
  • I suini possono risultare positivi per 7-8 mesi (lungo periodo di colonizzazione).
• Contro:
  • È necessario inviare il campione di tessuto corretto: il tessuto polmonare deve contenere una sezione trasversale delle vie aeree (cellule epiteliali bronchiali) (Figura 2).
  • Richiede un numero significativamente maggiore di batteri rispetto alla PCR.
  • Valuta solo una piccola quantità di tessuto.

Reazione a catena della polimerasi (PCR)

• Rileva la presenza di specifiche sequenze di acido nucleico batterico (DNA).
• Tipi di campioni: polmone, tampone (nasale, laringeo, tracheobronchiale o bronchiale) o lavaggio bronco-alveolare.
• Pro:
  • Sensibilità molto elevata (può rilevare piccole quantità di batteri)
  • È possibile combinare più campioni per aumentare la sensibilità diagnostica quando si effettua una diagnosi in allevamento.
  • I suini possono risultare positivi per 7-8 mesi (lungo periodo di colonizzazione).
  • Costo moderato.
• Contro:
  • Non dimostra la malattia.
  • I fluidi orali sono un tipo di campione scadente (molti falsi negativi)

Tabella 1: Riepilogo schematico della ricerca e dei risultati sul campo sulla sensibilità di diversi tipi di campioni per il test PCR di Mycoplasma hyopneumoniae.

	Sensibilità relativa	Pooling*
Fluidi orali	-	No
Tampone nasale	+	Variabile
Tampone laringeo	++	Vantaggioso
Tampone tracheo-bronchiale	++	Vantaggioso
Tampone bronchiale	+++	Vantaggioso
Lavaggio bronco-alveolare	++	No
Tessuto polmonare	++++	Sì

* Il pooling o raggruppare campioni può essere utile per aumentare la sensibilità diagnostica durante l'esecuzione di una diagnosi in allevamento; non da un solo suino.

Saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA)

• Rileva la presenza di anticorpi.
• Tipo di campione: siero.
• Pro:
  • Gli animali rimangono positivi a lungo.
  • Può essere utilizzato in casi cronici.
• Contro:
  • Gli anticorpi specifici ed i tempi di rilevamento possono variare leggermente tra i vari kit commerciali disponibili.
  • Non distingue tra anticorpi materni e di esposizione.
  • Il livello di anticorpi non è correlato alla protezione.
  • La vaccinazione non induce sieroconversione (altamente dipendente dal vaccino e dal dosaggio utilizzato).
  • Molti suini infetti non si sieroconvertono.
  • Gli anticorpi non vengono sempre rilevati durante l'intero periodo di infezione.
  • Qualche cross-reattività con altri micoplasmi, in particolare M. flocculare, che non è patogeno e si trova comunemente nei suini.

Interpretazione dei risultati:

Patologia macroscopica:

• Positivo: La patologia macroscopica del polmone può fornire una possibile diagnosi.
• Negativo: I primi casi di solito non si presentano con lesioni polmonari estese.

Coltura batterica:

• Positivo: Conferma la malattia.
• Negativo: Negativo, i batteri non vengono rilevati se il test viene eseguito molto tempo dopo l'infezione o con l'uso di antibiotici, o semplicemente non possono crescere a causa della crescita eccessiva di altri batteri (presenti ma molto difficili da coltivare).

IHC:

• Positivo: I batteri sono presenti nel sito della lesione.
• Negativo: Negativo o infezione troppo vecchia per rilevare i batteri o l'animale precedentemente trattato con antibiotici.

FA:

• Positivo: I batteri sono presenti nel sito della lesione.
• Negativo: Negativo o infezione troppo vecchia per rilevare i batteri o l'animale precedentemente trattato con antibiotici.

PCR:

• Positivo: I batteri sono presenti; non conferma la malattia.
• Negativo: Negativo o infezione troppo vecchia per rilevare i batteri o l'animale precedentemente trattato con antibiotici.

ELISA:

• Positivo: Anticorpi materni o precedente esposizione (di solito da 3 a 8 settimane dopo l'esposizione) a vaccini o batteri di campo.
• Negativo: Negativo o infezione che non stimola la sieroconversione o troppo recente per essere rilevata (di solito sono necessarie da 3 a 8 settimane dopo l'esposizione).

Scenari

Suini da ingrasso con tosse cronica:

• Necroscopia 1-3 suini morti di recente o eutanasia di suini con la tosse. Valuta macroscopicamente i polmoni per il consolidamento cranio-ventrale. Raccogliere diversi pezzi di polmone (assicurarsi di includere le vie aeree nel campione) e fissarli in formalina per IHC o FA.
• La percentuale di polmoni con lesioni è direttamente correlata all'impatto economico della malattia.

Confermare che gli animali da rimonta sono negativi al Mycoplasma hyopneumoniae

• Assicurati che non ci siano segni clinici di tosse.
• Raccogliere almeno 30 campioni di siero casuali dalla rimonta e analizzarli mediante ELISA.

Monitorare l'escrezione nella rimonta prima di introdurla in un allevamento di scrofe positive o negative

• Assicurati che non ci siano segni clinici di tosse.
• Raccogliere almeno 30 campioni casuali di tampone laringeo dalla rimonta. Mescolare (pool) in gruppi di 5 o 6 e analizzare mediante PCR.