Diagnosi di laboratorio: Malattia di Aujeszky (Pseudorabbia - PRV)

Test disponibili:

Immunoistochimica (IHC)

• Rileva la presenza di antigeni virali.
• Tipi di campione: tessuti.
• Pro:
  • Rileva il virus nel sito della lesione (buona prova del nesso di causalità).
  • Qualsiasi risultato positivo è considerato significativo.
• Contro:
  • È necessario inviare il campione di tessuto corretto.
  • Richiede una quantità significativamente maggiore di virus rispetto alla PCR.
  • Valuta solo una piccola quantità di tessuto.
  • È probabile che le infezioni latenti non vengano rilevate a meno che non siano inclusi il nervo trigemino e/o le tonsille.

Polymerase chain reaction (PCR)

• Rileva la presenza di specifiche sequenze di acido nucleico virale (DNA).
• Tipi di campioni: tessuti.
• Pro:
  • Alta sensibilità.
  • La quantificazione della PCR è associata alla presenza di lesioni.
  • Costo moderato:
    • I campioni di tessuto possono spesso essere combinati per ridurre i costi e minimizzare la perdita di sensibilità (soprattutto per quanto riguarda la rilevanza clinica).
  • Alcuni test PCR possono distinguere tra virus vaccinali deleti genici e infezioni da virus di campo.
• Contro:
  • Richiede campioni di tessuto (post mortem) per ottenere i migliori risultati.
  • È probabile che le infezioni latenti non vengano rilevate a meno che non siano inclusi il nervo trigemino e/o le tonsille.

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)

• Cerca la presenza di anticorpi.
• Tipi di campioni: siero.
• Pro:
  • Gli animali rimangono positivi per diverse settimane.
  • Può essere utilizzato in casi cronici.
  • Può essere utilizzato per differenziare l'esposizione al virus di campo dal vaccino con geni deleti (vedi Tabella 1).
  • Qualsiasi risultato positivo per il virus di campo è considerato significativo.
  • Ci vogliono solo 5-7 giorni perché gli animali diventino sieropositivi dopo l'esposizione al virus di campo.

La tabella 1 aiuta a dimostrare le capacità DIVA (differenziazione tra animali infetti da animali vaccinati) di alcuni test ELISA quando si utilizza un vaccino con geni deleti.

Risultato VN	Risultato di ELISA differenziale mirato al gene deleto gE / g1 o gB	Interpretazione
Positivo	Positivo	Animale esposto al virus di campo
Positivo	Negativo	Animale vaccinato non esposto al virus di campo
Negativo	Positivo	Errore di analisi, questo risultato non è possibile
Negativo	Negativo	Animale non vaccinato e non esposto al virus di campo

• Contro:
  • E' necessario far coincidere il test adeguato con la delezione dei geni appropriata nel vaccino.
  • Ci vogliono 10-14 giorni perché gli animali diventino sieropositivi dopo la vaccinazione.

Virus neutralization (VN)

• Rileva la presenza di anticorpi.
• Tipi di campioni: siero.
• Pro:
  • Gli animali rimangono positivi per diverse settimane.
  • Può essere utilizzato in casi cronici.
  • Sensibilità maggiore rispetto a ELISA (può rilevare una minore concentrazione di anticorpi).
• Contro:
  • Non è fattibile per un gran numero di campioni.
  • Ci vogliono 12 giorni perché gli animali diventino sieropositivi..
  • Non distingue tra vaccinazione e infezione da virus di campo.
  • L'affidabilità dipende fortemente dall'abilità dei tecnici.
  • La reattività dipende dall'isolato del virus utilizzato.

Interpretazione dei risultati:

IHC

• Positivo: Il virus è presente nel sito della lesione.
• Negativo: Negativo o infezione troppo vecchia per rilevare il virus.

PCR

• Positivo: Il virus è presente. La recente vaccinazione con un virus vivo modificato può risultare positiva alla PCR.
• Negativo: Negativo o il virus non viene rilevato se il test viene eseguito molto tempo dopo l'infezione.

ELISA (target gene deleted)

• Positivo: Anticorpi materni o precedente esposizione (> 5-7 giorni) al virus di campo.
• Negativo: Negativo o infezione troppo recente per essere rilevata.

VN

• Positivo: Esposizione precedente (> 5-14 giorni) al vaccino o al virus di campo.
• Negativo:
  • Negativo al vaccino o al virus di campo.
  • Infezione troppo precoce per essere rilevata (<5-7 giorni per il virus di campo o <10-14 giorni per il vaccino).

Scenari

Allevamento di scrofe con aborti

• Raccogliere 6-8 feti per raggruppare i campioni in pool per la PCR.
• Scrofe/scrofette abortite: raccogliere il siero delle scrofe/scrofette abortite di recente per la PCR. Possono essere mescolati in gruppi di 5.
  • I test ELISA dei singoli campioni possono essere eseguiti se > 7 giorni dopo l'aborto.
  • Negli allevamenti non vaccinati contro la malattia di Aujeszky, è preferibile eseguire la VN invece dell'ELISA a causa della maggiore sensibilità diagnostica del test.

Selezione di scrofette da rimonta da allevamenti vaccinati con animali noti positivi

• Raccogliere campioni di sangue da scrofette da rimonta al 100% e analizzarli individualmente mediante ELISA e VN.
  • Mantenere solo gli animali positivi a VN e negativi a ELISA (vedi Tabella 1 sopra)

Selezione di scrofette da rimonta da allevamenti vaccinati senza positività nota

• Raccogliere campioni di sangue da almeno 30 scrofette da rimonta selezionate casualmente e testarli individualmente con ELISA e VN.
  • Se tutti i campioni testati sono positivi per VN e negativi per ELISA (vedere la tabella 1 sopra), è possibile tenere tutti gli animali da rimonta.
  • Se un campione è negativo per VN, il 100% delle scrofette rimanenti deve essere analizzato e devono essere mantenute solo le scrofette vaccinate (VN = positivo).
  • Se una delle scrofette è positiva all'ELISA, rivalutare il valore di tenere qualsiasi animale nel gruppo, poiché il risultato suggerisce che l'allevamento di origine è ora positivo per la Malattia di Aujeszky.