Diagnosi di laboratorio: Ileite (Lawsonia intracellularis) nei suini

Test disponibili:

Patologia macroscopica

• Valuta la presenza di lesioni tissutali che possono suggerire la presenza di malattia.
• Localizzazione delle lesioni: ileo terminale (a volte può includere il cieco).
• Ci sono 3 forme molto diverse della malattia:
  • Enteropatia emorragica proliferativa (acuta/iperacuta).
    • Ispessimento della mucosa intestinale.
    • Contenuto emorragico con coaguli.

• Adenomatosi intestinale suina (cronica senza complicazioni):
  • Grave ispessimento intestinale corrugato.
  • Normalmente senza sangue.

• Enterite necrotica (cronica con complicanze):
  • Grave ispessimento intestinale corrugato.
  • Membrana fibrinonecrotica sopra l'intestino ispessito.
  • Normalmente senza sangue.

• Pro:
  • La diagnosi presuntiva può essere fatta dopo un esame macroscopico degli intestini.
  • Può differenziare le 3 diverse forme della malattia.
• Contro:
  • Le lesioni non sono esclusive/diagnostiche di ileite; altre malattie possono causare lesioni simili.
  • La valutazione dell'ispessimento può essere soggettiva, soprattutto quando le contrazioni intestinali fanno apparire le pareti intestinali temporaneamente più spesse del normale.

Istopatologia

• Valuta la presenza di lesioni tissutali (ispessimenti) che possono confermare la presenza della malattia.
• Tipo di campione: tessuti.
• Pro:
  • Le lesioni istopatologiche sono quasi diagnostiche:
    • Può essere confermata la presenza di proliferazione di cellule epiteliali immature delle cripte.
    • Poca o nessuna infiltrazione di cellule infiammatorie.
  • Può rilevare forme lievi della malattia.
• Contro:
  • I tessuti intestinali di animali morti di recente necessitano di fissazione in formalina.
  • A volte la malattia può essere segmentaria, soprattutto nelle fasi iniziali.

Immunoistochimica (IHC)

• Rileva la presenza di antigene batterico.
• Tipo di campione: tessuti.
• Pro:
  • Criterio di referenza.
  • Rileva i batteri nel sito della lesione (buona prova di causalità).
  • È possibile identificare quantità basse, moderate o elevate di batteri presenti.
• Contro:
  • Richiede un numero significativamente maggiore di batteri rispetto alla PCR.

Reazione a catena della polimerasi (PCR)

• Rileva la presenza di specifiche sequenze di acido nucleico batterico (DNA).
• Tipi di campioni: tessuti intestinali, tamponi fecali, feci.
• Pro:
  • Alta sensibilità.
  • La quantificazione della PCR è associata alla presenza di lesioni.
  • Costo moderato:
    • I campioni di feci o tessuti possono spesso essere combinati per ridurre i costi e minimizzare la perdita di sensibilità (specialmente per quanto riguarda la rilevanza clinica).
• Contro:
  • Alta sensibilità: conferma la presenza di batteri ma non di malattia.
  • Non fa differenza tra batteri vivi del vaccino e infezione da batteri di campo.

Saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA)

• Rileva la presenza di anticorpi.
• Tipo di campione: siero.
• Pro:
  • Gli animali rimangono positivi per diverse settimane.
  • Può essere utilizzato nei casi cronici.
  • Maggiore sensibilità diagnostica rispetto al test degli anticorpi fluorescenti indiretti (IFA).
• Contro:
  • Anticorpi specifici e tempi di rilevamento possono variare leggermente tra i vari kit commerciali disponibili.
  • Ci vogliono dalle 2 alle 4 settimane perché gli animali, a seconda della carica batterica, diventino sieropositivi.
  • Non fa differenza tra batteri vivi del vaccino e infezione da batteri di campo.

Anticorpi fluorescenti indiretti (IFA)

• Rileva la presenza di anticorpi.
• Tipo di campione: siero.
• Pro:
  • Gli animali rimangono positivi per diverse settimane.
  • Può essere utilizzato in casi cronici.
• Contro:
  • Sensibilità diagnostica inferiore rispetto a ELISA.
  • Non fattibile per un gran numero di campioni.
  • Ci vogliono dalle 2 alle 4 settimane perché gli animali, a seconda della carica batterica, diventino sieropositivi.
  • Non fa differenza tra batteri vaccinali vivi e infezioni da batteri di campo.
  • L'affidabilità dipende in larga misura dall'abilità dei tecnici.

Interpretazione dei risultati:

Patologia macroscopica

• Positivo: Spesso è sufficiente una diagnosi presuntiva.
• Negativo: Senza lesioni intestinali macroscopiche.

Istopatologia

• Positivo: Forte associazione tra ispessimento e malattia.
• Negativo: Nessuna lesione intestinale.

IHC

• Positivo: I batteri sono presenti nel sito della lesione.
• Negativo: Negativo o infezione troppo recente (batteri a crescita lenta) o troppo vecchie per rilevare i batteri.

PCR

• Positivo:
  • Ct <20 forte legame con le lesioni intestinali (IHC) e la malattia.
  • Ct>30 indica la presenza del microrganismo ma non è associato a lesioni intestinali (IHC negativo) e, quindi, è probabile che non abbia un impatto economico in quel momento.
• Negativo: Negativo o i batteri non vengono rilevati se il test viene eseguito troppo presto (batteri a crescita lenta) o molto tempo dopo l'infezione.

ELISA

• Positivo: Esposizione precedente (> 2-4 settimane) a vaccini o batteri di campo.
• Negativo:
  • Negativo al vaccino o ai batteri di campo.
  • Infezione troppo recente per essere rilevata (batteri a crescita lenta).
  • L'uso di antibiotici può inibire la crescita batterica e diminuire la risposta immunitaria.

IFA

• Positivo: Esposizione precedente (> 2-4 settimane) a vaccini o batteri di campo.
• Negativo:
  • Negativo al vaccino o ai batteri di campo.
  • Infezione troppo recente per essere rilevata (batteri a crescita lenta).
  • L'uso di antibiotici può inibire la crescita batterica e diminuire la risposta immunitaria.

Scenari:

Suini da ingrasso con diarrea (acuta o cronica):

• Raccogliere campioni fecali da 10 o più suini con diarrea non trattati con antibiotici e inviarli per PCR in pools di 5.
• Necroscopia 1-3 suini morti di recente o eutanasia di suini con diarrea. Valutare macroscopicamente l'ileo terminale per l'ispessimento. Raccogliere un campione di ileo e fissarlo in una soluzione di formalina per istopatologia e IHC.

Suini da ingrasso che non crescono (cronici):

• Necroscopia 1-3 suini morti di recente o eutanasia di suini con diarrea. Valutare macroscopicamente l'ileo terminale per l'ispessimento. Raccogliere un campione di ileo e fissarlo in una soluzione di formalina per istopatologia e IHC.

Determinazione del momento di esposizione:

• Raccogliere campioni da 10-15 suini a 8, 11, 14 e 17 settimane di età:
  • Due approcci al campionamento:
    • Trasversale: raccoglie contemporaneamente da diversi gruppi di età (ottieni risultati più velocemente).
    • Longitudinale – raccoglie dagli stessi suini nel tempo (si ottengono risultati più accurati).
  • Analisi dei campioni di siero mediante ELISA (preferibile) o IFA.
  • Analisi di campioni fecali mediante PCR in pool di 5.