Diagnosi di laboratorio: Malattia degli Edemi

Test disponibili

Coltura batterica

• Isolamento di organismi viventi.
• Tipo di campione: feci, contenuto intestinale.
• Pro:
  • I batteri sono facili da coltivare in 1 giorno.
  • Facile da fare in qualsiasi laboratorio (anche interno).
  • Costo relativamente basso.
• Contro:
  • Alcuni E. coli fanno parte della flora intestinale normale.
  • I suini hanno molteplici E. coli allo stesso tempo.
  • Se i suini sono stati precedentemente trattati con antibiotici, questo può prevenire la crescita batterica.

Suscettibilità agli antimicrobici (antibiogramma)

• Test in vitro: capacità di un organismo vivente di crescere sotto specifiche concentrazioni di diversi antimicrobici.
• Tipo di campioni: feci, contenuto intestinale.
• Pro:
  • Identificazione della suscettibilità o resistenza di ceppi specifici ai comuni antimicrobici.
  • Identificazione dei trend di resistenza agli antimicrobici.
• Contro:
  • Richiede un isolato batterico.
  • I test in vitro possono differire leggermente dai risultati in vivo.
  • Alcuni antimicrobici specifici potrebbero non essere inclusi o potrebbero richiedere test speciali separati.
  • Costo moderato.

Istopatologia

• Valuta la presenza di lesioni tissutali (danno) che possono confermare la presenza di malattia. A volte la presenza di organismi può essere rilevata anche direttamente (batteri e parassiti) o indirettamente (virus) utilizzando speciali coloranti aggiuntivi.
• Tipo di campione: tessuti.
• Pro:
  • Associa l'adesione batterica al danno intestinale.
  • Non è necessaria alcuna colorazione speciale.
• Contro:
  • I tessuti intestinali devono essere fissati con formaldeide entro 15 minuti dalla morte dell'animale poiché il tessuto intestinale si decompone rapidamente.
  • La malattia può essere segmentaria, quindi è necessario inviare più campioni intestinali.

Genotipizzazione

• Una tecnica PCR (reazione a catena della polimerasi) che rileva la presenza di una sequenza specifica di acidi nucleici (DNA) associata a geni di virulenza noti.
• Pro:
  • Eseguito mediante PCR; facile da fare.
  • Aiuta a identificare la patogenicità rilevando la presenza di geni (non necessariamente espressione genica) associati a fattori di virulenza.
    • Geni di tossine: EAST1, LT, STa, STb, Stx1, Stx2, Stx2e.
    • Geni di Pilus: F18, F41, K88 (F4), K99 (F5), 987P (F6).
    • Geni di adesine: AIDA, EAEA, PAA
  • Facilita la corretta selezione del vaccino (basato sui pili).
  • Aiuta a confermare che l'isolato ha i geni per la Malattia degli Edemi.

Geni di E. coli rilevati dalla genotipizzazione della PCR e dalla loro funzione. I geni evidenziati in rosso sono importanti per la diagnosi della Malattia degli Edemi.

Gene	Tipo	Descrizione
EAST1	Tossina	La tossina intestinale si lega allo stesso recettore e stimola la stessa via secretoria di Sta (la causa della diarrea non è ben stabilita)
LT	Tossina	Tossina intestinale che stimola la secrezione intestinale
STa	Tossina	Tossina intestinale che stimola la secrezione intestinale principalmente nei suini giovani (diminuisce l'assorbimento di acqua ed elettroliti)
STb	Tossina	Tossina intestinale che stimola la diarrea secretoria principalmente nei suini anziani (aumenta la secrezione di enterociti)
Stx1	Tossina	La tossina intestinale può essere trovata in ceppi patogeni e non patogeni
Stx2	Tossina	La tossina intestinale può essere trovata in ceppi patogeni e non patogeni
Stx2e	Tossina	Tossina sistemica che induce danno vascolare e Malattia degli Edemi
F18 (F107)	Adhesina	Pili (fimbria) utilizzato per l'adesione che è presente dopo i 20 giorni di età e comunemente associato a diarrea post-svezzamento e Malattia degli Edemi
F41	Adhesina	Pili (fimbria) utilizzato per l'adesione principalmente nei neonati
K88 (F4)	Adhesina	Pili (fimbria) aderisce dalla nascita a tutte le età
K99 (F5)	Adhesina	Pili (fimbria) utilizzati per l'adesione principalmente nei neonati
987P (F6)	Adhesina	Pili (fimbria) utilizzati per l'adesione principalmente nei neonati
AIDA	Adhesina	"Adesina coinvolta nell'adesione diffusa" non fimbriale, più comunemente riscontrata in combinazione con F18
EAE	Adhesina	Adesina non fimbriale che contribuisce alle lesioni da adesione e da cancellazione ("attaching-and-effacing")
PAA	Adhesina	Adesina non fimbriale essenziale per il verificarsi di lesioni da adesione e cancellazione ("attaching-and-effacing")

• Contro:
  • Richiede isolamento batterico.
  • I suini possono avere più di un ceppo contemporaneamente, quindi dobbiamo confidare di aver isolato il ceppo corretto.
  • Prezzo moderato, ma di solito viene testato solo un isolato.

Interpretazione dei risultati:

Coltura batterica:

• Deve essere un E. coli emolitico.
  
• Purezza:
  • Crescita pura - altamente suggestiva che sta contribuendo alla malattia.
  • Crescita mista: valore discutibile.
• Quantità:
  • Alto: altamente suggestivo che stia contribuendo alla malattia.
  • Moderato: interpretazione variabile.
  • Basso: valore discutibile (potrebbe essere un contaminante).
  • Nessuna crescita: animale eventualmente trattato in precedenza con antibiotici o agenti senza un contributo significativo.

Suscettibilità antimicrobica (antibiogramma):

• Suscettibile - Possibile buona scelta per il trattamento se l'antimicrobico può raggiungere il tessuto bersaglio.
• Resistente: selezionare un antimicrobico diverso.
• MIC: se viene eseguita la MIC (concentrazione minima inibente), è necessario assicurarsi che l'antimicrobico selezionato raggiunga il valore MIC indicato nell'organo bersaglio.

Istopatologia:

• Positivo: Forte associazione causale se è in grado di dimostrare lesioni intestinali con E. coli aderente alle cellule epiteliali.

• Negativo: Nessuna lesione intestinale.

Genotipizzazione:

• La genotipizzazione è necessaria per confermare che l'isolato abbia fattori di virulenza associati alla Malattia degli Edemi.
  • Deve essere F4 o F18.
  • Deve avere una tossina simile a Shiga (Stx2e).

Scenario
Suini con diarrea post-svezzamento:

• Raccogliere tamponi rettali da 2 o più suini con diarrea, non trattati con antibiotici e inviarli per coltura batterica, antibiogramma e genotipizzazione.
• Eutanasia di 1-3 suinetti con diarrea che non hanno ricevuto cure. Raccogliere immediatamente 3 campioni di intestino da ogni suinetto e metterli in una soluzione di formaldeide. Raccogliere campioni intestinali freschi per inviarli refrigerati per coltura batteriologica, antibiogramma e genotipizzazione.