实验室诊断：水肿病

可用的检测

细菌培养

• 活有机体的分离。
• 样本类型：粪便、肠道内容物。
• 优点:
  • 细菌很容易在一天内生长。
  • 易于在任何实验室（包括内部实验室）进行。
  • 成本相对较低。
• 缺点:
  • 一些大肠杆菌是正常肠道菌群的一部分。
  • 猪体内同时存在多种大肠杆菌。
  • 曾用抗生素治疗的猪可以阻止细菌生长。

抗菌药物敏感性

• 测试活有机体在特定浓度的不同抗菌剂下的体外生长能力。
• 样本类型：粪便、肠道内容物。
• 优点:
  • 鉴定特定分离株对常见抗菌剂的敏感性或耐药性。
  • 确定抗菌药物耐药性趋势。
• 缺点:
  • 需要进行细菌分离。
  • 体外测试可能与体内测试结果略有不同。
  • 某些特定的抗菌剂可能未经过测试或需要单独的特殊测试。
  • 成本中等。

组织病理学

• 评估可以确认疾病存在的组织病变（损伤）的存在。 有时还可以通过额外的特殊染色直接（细菌和寄生虫）或间接（病毒）检测有机体的存在。
• 样本类型：组织。
• 优点:
  • 将细菌粘附与肠道损伤联系起来。
  • 无需特殊染色。
• 缺点:
  • 需要在猪死亡后15分钟内用福尔马林固定肠道组织 - 肠道组织迅速分解
  • 疾病可能是节段性的，因此应提交多个肠道样本

基因分型

• 聚合酶链反应（PCR）技术，检测与已知毒力基因相关的特定核酸序列（DNA）的存在。
• 优点：
  • 通过PCR完成；操作简单
  • 通过检测与毒力因子相关的基因（不一定是基因表达）的存在来帮助识别致病性。
  • • 毒素基因: EAST1, LT, STa, STb, Stx1, Stx2, Stx2e
    • 菌毛基因: F18, F41, K88 (F4), K99 (F5), 987P (F6)
    • 粘附素基因: AIDA, EAEA, PAA
  • 有助于正确选择疫苗（匹配正确的菌毛）。
  • 有助于确认分离株有水肿病的基因。

通过 PCR 基因分型检测的大肠杆菌基因及其功能。 以红色突出显示的基因对于帮助诊断水肿病很重要。

基因	类型	概述
EAST1	毒素	肠道毒素与相同的受体结合并刺激与STa相同的分泌途径（腹泻原因尚未确定）
LT	毒素	刺激肠道分泌的肠道毒素
STa	毒素	刺激仔猪肠道分泌的肠道毒素（减少水和电解质的吸收）
STb	毒素	肠毒素主要刺激老龄猪的分泌性腹泻（增加肠细胞的分泌）
Stx1	毒素	肠道毒素存在于致病性和非致病性毒株中
Stx2	毒素	肠道毒素存在于致病性和非致病性毒株中
Stx2e	毒素	引起血管损伤和水肿病的全身毒素
F18 (F107)	粘附素	菌毛用于附着，在20天后出现，通常与断奶后溃疡和水肿病有关
F41	粘附素	新生仔猪用于附着的菌毛
K88 (F4)	粘附素	各个日龄阶段用于附着的菌毛
K99 (F5)	粘附素	新生仔猪用于附着的菌毛
987P (F6)	粘附素	新生仔猪用于附着的菌毛
AIDA	粘附素	常与F18一起的非菌毛“参与扩散粘附的粘附素”
EAE	粘附素	有助于“附着和消除”病变的非菌毛粘附素
PAA	粘附素	对于产生“附着和消除”病变必不可少的非菌毛粘附素

• 缺点:
  • 需要进行细菌分离。
  • 需要进行细菌分离。
  • 格适中，但通常只测试1个分离株。

结果解读：

细菌培养:

• 必须是溶血性大肠杆菌
  
• 纯度:
  • 单一毒株生长：高度表明疾病的促成因素。
  • 混合毒株生长：值得怀疑的值。
• 数量:
  • 高：高度表明疾病促成因素。
  • 中度：不同的解释。
  • 低：有问题的值（可能是污染物）。
  • 无生长：动物可能以前使用过抗生素治疗或不是重要的致病菌。

抗菌药物敏感性：

• 易感：如果抗菌剂能到达靶组织，可能是治疗的良好选择。
• 抗药性：选择不同的抗菌剂
• 最低抑菌浓度：如果有最低抑菌浓度，确保选择的抗菌剂达到目标器官中列出的最低抑菌浓度值。

组织病理学：

• 阳性：如果能够证明大肠杆菌粘附在上皮细胞上导致肠道病变，则与疾病密切相关。
• 阴性：无肠道病变。

基因分型：

• 基因分型对于确认分离株具有与水肿病相关的必要毒力因子是必要的
  • 肯定是 F4 或 F18
  • 必须有志贺样毒素 (Stx2e)

方案
断奶后腹泻的猪：

• 从2头或2头以上未经治疗的猪上收集直肠拭子，并进行细菌培养、抗菌药物敏感性和基因分型测试。
• 对1-3头未经治疗的腹泻仔猪进行安乐死。立即收集每头仔猪的3个肠道样本并将其放入福尔马林溶液中。收集新鲜肠道样本，以供冷冻后进行细菌培养、抗菌敏感性和基因分型测试。