实验室诊断：猪繁殖与呼吸综合症（PRRS）

可用分析

聚合酶链反应（PCR）

• 检测病毒核酸（RNA）特定序列的存在。
• 样本类型：组织，全血，血清，口腔液体等。
• 优点：
  • 使用单独的引物同时检测同一样品中的PRRS 1型（欧洲）和2型（北美）。
  • 灵敏度高（可以检测到少量病毒）。
  • 早期发现-急性病例应为阳性。
  • 可以使用许多不同的样本类型（组织，血液，血清，口腔液体等）。
  • 成本适中：
    • 通常可以同时检测5个血清或组织样本以降低成本，同时最大程度地降低灵敏度损失。
    • 由于预期的较高Ct值（较低的病毒浓度），通常不合并口腔液体，这可能会导致敏感性显着下降。
• 缺点:
  • 实验室必须定期更新引物以避免假阴性。
    • PRRS 1型和2型引物都必须更新。
  • 测序需要区分疫苗病毒和野生型感染。

酶联免疫吸附测定（ELISA）

• 检测抗体的存在。
• 样品类型：血清或口腔液体（某些试剂盒）。
• 优点：
  • 大多数可检测PRRS 1型和2型抗体。
  • 动物保持阳性数月（3-12个月）。
  • 可用于慢性病例。
• 缺点:
  • 各种可用的商品试剂盒之间，检测到的特异性抗体和检测时间可能略有不同。
  • 动物血清阳性需要7到10天。
  • 无法区分母源抗体与暴露。
  • 无法区分疫苗与野生型感染。

免疫组织化学（IHC）

• 检测病毒抗原的存在。
• 样本类型：组织。
• 优点 :
  • 病变部位检测病毒（良好的病因证明）。
  • 可以识别病毒的低、中、高含量。
• 缺点 :
  • 必须提交正确的组织样本。
  • 与PCR相比，需要更多的病毒存在。
  • 仅可评估少量的组织样本。

基因测序

• 测序病毒的核酸基因（RNA）。
• 测序病毒的核酸基因（RNA）。
• 优点:
  • 可以区分野生型病毒和疫苗。
  • 可以帮助区分新病毒的引入与现有或过去的病毒。
• 缺点:
  • 昂贵。
  • 通常仅对ORF5进行测序，其仅为约15,000个碱基对中的600个。
  • CT值大于34的样本往往难以测序。

表1：爱荷华州立大学兽医诊断实验室基于口腔液体样品中PRRS PCR循环阈值（Ct）值的序列成功率。Chris Rademacher等人，2016

样本	PCR Ct范围	测试总样本数	测序样本数	测序阳性样本比例
所有样本	<30	2016	2013	99.85
	30.00-31.99	389	361	92.80
	32.00-33.99	324	265	81.79
	34.00-35.99	185	109	58.92
	36.00-37.00	65	26	40.00

间接荧光抗体（IFA）

• 检测抗体的存在。
• 样品类型：血清。
• 优点:
  • 与PCR测试一起，可以用作意外ELISA阳性样品的确认测试。
    
• 缺点:
  • 对于大量样品不可行。
  • 用于分析的病毒分离物对结果的影响。
  • 可靠性高度依赖于技术人员的技能。

结果解释

PCR

• 阳性-病毒存在/传播高度提示病因，尤其是Ct值较低且存在临床症状。最近用改良活病毒接种疫苗可导致PCR阳性。
• 阴性-如果在感染后期进行检测，则可能会呈阴性或未检测到病毒。

ELISA

• 阳性-母源抗体或过去接触疫苗或野生型病毒（通常在接触后7-10天以上）。
• 阴性-阴性或感染初期以至于无法检测到（通常必须在暴露后至少7-10天）。

IHC

• 阳性–病变部位存在病毒。
• 阴性-如果在感染后期进行检测，则可能会呈阴性或未检测到病毒。

基因测序

• 疫苗病毒–预期同源性>99%。
• 野生型病毒-估计每年约有1-2%的同源性损失。

IFA

• 阳性-母源抗体或过去接触疫苗或野生型病毒（通常在接触后7-10天以上）。
• 阴性-阴性或感染初期以至于无法检测到（通常必须在暴露后至少7-10天）。

场景

母猪/后备母猪流产

• 流产的胚胎：收集6-8个胚胎合并进行PCR测试。流产的胚胎中只有大约50％的PCR阳性（因此需要对许多胚胎进行采样），但是阳性胚胎中病毒的浓度很高，因此可以每10个一组进行PCR检测。
• 流产的母猪/后备母猪：收集最近流产（<10天）的母猪/后备母猪的血清以进行PCR测试。可以每5组一起进行测试。ELISA测试没有用，因为母猪/后备母猪通常需要7到9天才能检测出阳性。

母猪/后备母猪繁殖问题

• 从受影响的母猪/后备母猪收集15至20个样品，从未受影响的母猪/后备母猪收集15至20个样品，并通过PCR（5个或6个一组）和ELISA（单独）进行测试。

分娩时的弱小仔猪

• 可以从有较弱仔猪的窝中收集群体口腔液体，并通过PCR进行测试。
• 可以在产房从不同窝的猪中收集睾丸（如果进行阉割），尾巴，舌头组织（死猪）。可以将大量样本集中在一起进行测试。
• 通过每窝收集2至3头仔猪，收集10窝受影响仔猪的血清样品，并通过PCR进行测试，每组5-6头仔猪。确保仔猪未进行PRRS疫苗接种。

具有PRRS急性临床体征的生长猪

• 从4到6个不同猪栏中收集口腔液体，并通过PCR分别进行测试。不要合并样本进行测试。
• 从4到6个不同猪栏中收集口腔液体，并通过PCR分别进行测试。不要合并样本进行测试。

具有PRRS慢性临床体征的生长猪

• 从4到6个不同猪栏中收集口腔液体，并通过PCR分别进行测试。不要合并样本进行测试。也可以通过ELISA测试口腔液体样品。
• 从具有临床体征的猪中或随机取样，采集30份血清样品，并通过PCR进行测试。可以以5个或6个为一组进行PCR测试。还可以通过ELISA测试单个样品以确认暴露。