Diagnóstico laboratorial: Actinobacillus pleuropneumoniae (APP)

Testes disponíveis:

Patologia macroscópica

• Avalia a presença de lesões teciduais que podem ser quase diagnósticas da doença.
• Localização das lesões: pulmão.
• Áreas de consolidação necro-hemorrágica no pulmão acompanhadas de pleurite fibrinosa (figura 1).

• Prós:
  • O diagnóstico presuntivo pode ser feito após um exame macroscópico dos pulmões.
• Contras:
  • Actinobacillus suis pode causar alguns ferimentos semelhantes, mas menos graves.
  • Não identifica o sorotipo.

Cultivo bacteriano

• Isolamento de organismos vivos.
• Tipos de amostra: pulmão.
• Prós:
  • Pode ser realizado em qualquer laboratório (mesmo interno).
  • O biótipo I requer NAD (normalmente fornecido por uma colônia cultivada de Staphylococcus aureus).
  • O biótipo II não requer NAD.
  • Custo relativamente baixo.
    ​
• Contras:
  • Nem sempre é fácil crescer.
  • Não identifica o sorotipo.
  • Se os porcos tiverem sido previamente tratados com antibióticos, isto pode impedir o crescimento bacteriano.

Susceptibilidade antimicrobiana (antibiograma)

• Teste in vitro: capacidade de um organismo vivo crescer sob concentrações específicas de diferentes antimicrobianos.
  Tipos de amostra: pulmão.
• Prós:
  • Identificação de suscetibilidade ou resistência de cepas específicas a antimicrobianos comuns.
    Identificação de tendências de resistência antimicrobiana.
• Contras:
  • Requer um isolado bacteriano.
  • Os testes in vitro podem diferir ligeiramente dos resultados in vivo.
  • Alguns antimicrobianos específicos podem não estar incluídos ou exigir testes especiais separados.
  • Custo moderado.

Reação em cadeia da polimerase (PCR) Geral ou Sorotipagem

• Detecta a presença de sequências específicas de ácido nucleico bacteriano (DNA).
• Tipos de amostras: pulmão e amígdalas.​
• Prós:
  • Sensibilidade alta.
  • Geral
    • Tem como alvo os genes da toxina ApxIV.
    • Presente em todos os sorotipos de APP.
  • Serotipagem
    • Tem como alvo diferentes partes dos genes das toxinas ApxI, ApxII e ApxIII.
      Consulte a Tabela 1 para sorotipagem e produção de toxinas.
  • Custo moderado.
    • As amostras de tecido muitas vezes podem ser combinadas para reduzir custos e minimizar a perda de sensibilidade.
• Contras:
  • São necessários vários primers específicos para determinar o sorotipo.
  • Nem todas as cepas podem ser digitadas.
    • Existem actualmente 19 serotipos identificados e este número continuará a aumentar.
  • Nem todos os testes são validados para analisar amostras de amígdalas.

Tabla 1: Produção de toxinas para cada sorotipo.

	Produção de toxinas
Sorotipo	ApxI	ApxII	ApxIII	ApxIV
1	X	X		X
2		X	X	X
3		X	X	X
4		X	X	X
5	X	X		X
6		X	X	X
7		X		X
8		X	X	X
9	X	X		X
10	X			X
11	X	X		X
12		X		X
13		X		X
14	X			X
15		X	X	X
16	X	X		X
17		X		X
18		X		X
19		X		X

Ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) Antígeno LPS-O

• Detecta a presença de anticorpos.
• Tipos de amostras: soro.
• Alvo: Antígeno LPS-O.
• Prós:
  • Pode ser útil ajudar na sorotipagem.
  • Alta sensibilidade.
• Contras:
  • Alta quantidade de reatividade cruzada entre sorotipos devido ao compartilhamento de epítopos capsulares e de antígeno LPS-O.
    • Os seguintes sorotipos apresentam reação cruzada porque compartilham antígenos LPS-O:
      • Reação cruzada entre os sorotipos 1, 9 e 11.
      • Reação cruzada entre os sorotipos 3, 6, 8, 15, 17 e 19.
      • Reação cruzada entre os sorotipos 4, 7 e 18.
  • Não determina o sorotipo específico com um único teste.
  • Muito caro e impraticável testar todos os sorotipos.

Ensaio de imunoabsorção enzimática do antígeno ApxIV (ELISA)

• Detecta a presença de anticorpos.
• Tipos de amostras: soro.
• Alvo: Antígeno ApxIV.
• Prós:
  • Alta sensibilidade.
  • Detecta todos os sorotipos de APP.
• Contras:
  • Não determina o sorotipo específico.
  • Não determina a virulência das cepas.

Interpretação de resultados:

Patologia macroscópica

• Positivo: O diagnóstico presuntivo é muitas vezes suficiente.
  Negativo: Sem lesões pulmonares macroscópicas.

Cultivo bacteriano

• Positivo:
  • Biótipo 1: dependente de NAD.
    Biótipo 2: independente de NAD.
• Negativo: Negativo ou animal possivelmente previamente tratado com antibióticos.

Susceptibilidade antimicrobiana (antibiograma)

• Sensível: Possível boa escolha de tratamento se o antimicrobiano puder atingir o tecido alvo.
  Resistente: um antimicrobiano diferente deve ser selecionado.
  MIC: caso seja realizada a MIC (concentração inibitória mínima), deve-se garantir que o antimicrobiano selecionado atinja o valor de MIC indicado no órgão alvo.

PCR

• Positivo:
  • Organismo presente.
  • Pode identificar a presença de diferentes genes que auxiliam na sorotipagem.
• Negativo:
  • Infecção negativa ou muito antiga.
  • Animal possivelmente previamente tratado com antibióticos.
  • Nem todas as cepas podem ser sorotipadas (não tipificáveis).

ELISA Antígeno LPS-O

• Infecção negativa ou muito antiga.
• Animal possivelmente previamente tratado com antibióticos.
• Nem todas as cepas podem ser sorotipadas (não tipificadas).

ELISA Antígeno ApxIV

• Positivo: Organismo presente.
• Negativo: negativo, infecção muito antiga ou animal possivelmente previamente tratado com antibióticos.

Caso Clínico:

Suínos de terminação com morte súbita ou doença respiratória (aguda)

• Necrópsia de 1-3 porcos recém-mortos ou eutanásia. Avaliação macroscópica do pulmão em busca de áreas necro-hemorrágicas de consolidação acompanhadas de pleurite fibrinosa.
• Enviar os pulmões afetados para cultura bacteriana e teste geral de APP PCR e, se positivo, para sorotipagem por PCR.

Estabelecer o estado negativo da granja

• Amostra de 30 dos maiores suínos confinados da granja e testa-os 2 a 3 vezes por ano usando ApxIV ELISA.